疑似桃流膠病菌N2的分類鑒定與致病性測(cè)定.pdf

1、桃(Prunus persica L．)在我國(guó)廣泛種植，桃流膠病(Peach tree gummosis)是桃樹的主要病害之一，侵染成年桃樹和幼齡桃樹，主要引起樹干、主枝流膠，阻礙樹體的生長(zhǎng)發(fā)育，降低果實(shí)的品質(zhì)和產(chǎn)量。葡萄座腔菌屬真菌(Botryosphaeria)是造成桃流膠的主要病原菌，已公開報(bào)道的湖北省的桃流膠病菌有 Fusicoccum aesculi、Lasiodiplodia theobromae和Diplodia seri

2、ata。本研究以華中農(nóng)業(yè)大學(xué)果樹試驗(yàn)基地捕捉到的病原菌孢子和五年生‘春雪’桃為研究材料，對(duì)所捕捉到的孢子進(jìn)行分離純化培養(yǎng)得到 N2菌株，通過(guò)觀察菌落和分生孢子形態(tài)，再結(jié)合系統(tǒng)發(fā)育分析和致病性測(cè)定，對(duì)N2菌株進(jìn)行鑒定。主要結(jié)果如下：
　　1. N2菌株的菌落和分生孢子形態(tài)與已知的桃流膠病菌F. aesculi、L．theobromae和D．seriata不完全相同。N2菌落整體呈不規(guī)則圓形，培養(yǎng)初期菌絲塊周圍生長(zhǎng)較慢，菌絲還未長(zhǎng)滿培

3、養(yǎng)皿之前呈環(huán)形，氣生菌絲為白色絮狀，后期菌落逐漸變?yōu)槟G色直至黑色，菌絲發(fā)達(dá)，培養(yǎng)20 d之后可在菌落中觀察到散生或聚生的黑色顆粒狀分生孢子器。顯微鏡下觀察分生孢子為無(wú)色透明、初期無(wú)隔、近橢圓形至梭形狀，一端近尖或兩端鈍圓，在老熟時(shí)變?yōu)?-2分隔的褐色孢子，大小為11.2-18.8（13.7）μm×4.9-9.9（6.1）μm，長(zhǎng)寬比為2.3±0.2。菌株在13-33℃均能生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)溫度為28℃。初步推斷N2為葡萄座腔菌屬的Neof

4、usicoccum parvum。
　　2.通過(guò)分子生物學(xué)手段，用特異性引物對(duì)ITSl/ITS4、EF-728F/EF-986R、Bt2a/Bt2b對(duì)ITS、EF1-ɑ、β-tubulin三個(gè)基因序列進(jìn)行擴(kuò)增和測(cè)序，利用測(cè)序數(shù)據(jù)和PAUR*4.0軟件構(gòu)建出N2菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹，鑒定其屬于N．parvum。
　　3.離體接種和田間接種N2菌株，均能在枝條上觀察到病斑和流膠現(xiàn)象，對(duì)病健交界處的組織進(jìn)行病原菌的再分離，得到其純培養(yǎng)