江蘇某地區(qū)部分牛場(chǎng)產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌的分離鑒定及其遺傳相關(guān)性分析.pdf

1、產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌（Shigatoxin-producingEscherichiacoli，STEC）是一類能引起人類潛在致命性疾病的食物源病原。患者可出現(xiàn)腹瀉，出血性腸炎和溶血性尿毒癥（Haemolyticuraemicsyndrome，HUS）。STEC感染已成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題，它涉及大暴發(fā)流行和HUS，是造成兒童嚴(yán)重腎衰竭的主要原因。許多血清型的STEC與人類疾病有關(guān)，已報(bào)道的STEC感染中，大多數(shù)暴發(fā)流行和散發(fā)病例都涉及ST

2、EC的一種特殊類型—腸出血性大腸桿菌（enterohemorrhageEscherichiacoli，EHEC）O157∶H7，非O157STEC感染的病例也在增加。
　　 反芻動(dòng)物，特別是牛，是STEC的主要貯主。典型的感染主要通過(guò)攝食污染的食物或水、與動(dòng)物的直接接觸或經(jīng)由人-人傳播造成。牛作為STEC最大的儲(chǔ)庫(kù)，對(duì)人類的健康和食品安全構(gòu)成威脅。鑒于EHEC對(duì)人類的高致病性，對(duì)其在牛群中的流行病學(xué)、致病性和致病機(jī)理等方面的研究

3、顯得很有必要。
　　 1、江蘇某地區(qū)部分牛場(chǎng)產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌的分離鑒定
　　 通過(guò)對(duì)江蘇某地區(qū)共6個(gè)（肉、奶）牛場(chǎng)，分4、5、6、11月份，進(jìn)行定群跟蹤調(diào)查，初步了解STEC在牛群中的帶菌和流行情況?；诒緦?shí)驗(yàn)室已經(jīng)建立的多重PCR方法對(duì)stx1、stx2、eaeA、ehxA四個(gè)基因進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)檢測(cè)出的陽(yáng)性樣品，O157STEC通過(guò)CT-SMAC平板無(wú)色菌落的方法分離，非O157STEC采用挑選CT-SMAC平板上紅色

4、菌落的方法進(jìn)行分離。總體上，肉牛stx基因陽(yáng)性率為9.8％(25/256)低于奶牛陽(yáng)性率(20.2％，214/1059);肉牛分離率為0.4％(1/256)低于奶牛分離率(4.7％，50/1059)。相同月份不同牛場(chǎng)的stx基因陽(yáng)性率和STEC分離率差異明顯;同一牛場(chǎng)的初篩率秋季（11月份52.9％，83/157）高于春、夏季（4月11％，11/100，和6月16.9％，43/254）。本次共分離到12個(gè)O血清型STEC，16個(gè)OH血清

5、型，其中O26、O49、O55、O65、O68、O74、O109、O136、O153、O157等血清型據(jù)報(bào)道曾引起人類腸道疾病的暴發(fā)，有2種血清型(O26∶H11，O157∶H7)與人類HUS患者體內(nèi)分離的血清型相符。該地區(qū)的優(yōu)勢(shì)血清型為O109和O74，其中O74∶H29血清型STEC在多個(gè)肉奶牛場(chǎng)都分離到。本文使用STEC灌服感染BALB/c小鼠的模型，小鼠于攻毒后2-5d出現(xiàn)病變、死亡。從受試菌株對(duì)小鼠致死情況來(lái)看，分離到的部分牛

6、源O157和非O157STEC菌株，具有一定的致病性。受試菌株對(duì)小鼠致死率呈現(xiàn)一定的血清型相關(guān)，即O157致死率最高，O26次之，O109最低。
　　 2、牛源STEC分離株的遺傳相關(guān)性分析
　　 對(duì)A奶牛場(chǎng)30株O109∶H6血清型，Stx2+毒力基因型STEC，進(jìn)行XbaI酶切后脈沖場(chǎng)凝膠電泳(pulsedfieldgelelectrophoresis，PFGE)分析，受試分離株雖然從不同的牛體分離到，但獲得了完全相

7、同的酶切帶型。F值為1，顯然它們屬于同一克隆群。有力支持了O109∶H6血清型在該場(chǎng)占優(yōu)勢(shì)。
　　 對(duì)13株不同來(lái)源的STEC分離株進(jìn)行XbaI-PFGE，產(chǎn)生了13種不同的酶切圖譜。總體來(lái)看，不同來(lái)源的STECDice相似系數(shù)在49％-73％之間，說(shuō)明這些菌株具有不同的遺傳發(fā)生背景及進(jìn)化路線，也反映該地區(qū)牛源STEC克隆群豐富，潛在致人感染的機(jī)會(huì)可能更多。所以對(duì)牛源分離株間遺傳相關(guān)性的分析可為從源頭上保證食品安全，追蹤感染來(lái)源