番茄離體根雙重培養(yǎng)體系建立及其菌根形成信號分子初步鑒定.pdf

1、叢枝菌根(AM)真菌與80％以上陸生植物形成互惠共生體－叢枝菌根。AM真菌促進宿主植物礦質(zhì)營養(yǎng)吸收，增強抗逆抗病能力，對維持陸生生態(tài)系統(tǒng)及植物多樣性有重要作用。二者共生關系的建立，關鍵受植物分泌的次生代謝物質(zhì)所影響，從而導致AM真菌的定向生長、分支、附著胞等的形成，利用離體根雙重培養(yǎng)體系對試驗材料櫻桃番茄Micro-Tom野生型和菌根侵染突變體(Myc-)m161根系分泌物進行研究有助于了解AM真菌與植物間相互作用的關鍵信號物質(zhì)，具有重

2、要的意義。
　　 因此，本文(1)利用發(fā)根農(nóng)桿菌Agrobacterium rhizogenes誘導櫻桃番茄Micro-Tom產(chǎn)生毛狀根，并在此基礎上成功建立了叢枝菌根（AM）真菌根內(nèi)球囊霉Glomusintraradices與轉(zhuǎn)移RiT-DNA番茄離體毛狀根的雙重培養(yǎng)體系。(2)利用高效液相色譜分離并收集櫻桃番茄Micro-Tom野生型根系分泌物中與菌根侵染突變體(Myc)m161關鍵的差異物質(zhì)，再將其回補到雙重培養(yǎng)體系中，觀

3、察比較差異物質(zhì)的加入對AM真菌侵染突變體m161的影響。主要研究結果如下：
　　 1、利用發(fā)根農(nóng)桿菌A4誘導櫻桃番茄Micro-Tom長出毛狀根，建立毛狀根離體培養(yǎng)系統(tǒng)。結果表明：下胚軸共培養(yǎng)法轉(zhuǎn)化效率最高；500mg/L羧芐青霉素的抗生素濃度是除去發(fā)根農(nóng)桿菌A4的最佳條件；毛狀根的生長曲線呈“S”型，21d左右生長達到最大量，最大可增加25倍；PCR檢測結果證明Ri質(zhì)粒的T-DNA已成功整合到了櫻桃番茄毛狀根基因組中。

4、　　 2、將轉(zhuǎn)移RiT-DNA番茄根與叢枝菌根(AM)真菌根內(nèi)球囊霉Glomus intraradices建立雙重培養(yǎng)體系。結果表明：該真菌侵染14天左右，菌絲開始形成多級分支，17～21天時，一些菌絲頂端膨大，長出新生孢子。接種后3個月時，每皿袍子數(shù)量達到600～800個。新形成的孢子無需休眠，可直接侵染番茄離體根。成功的番茄雙重培養(yǎng)為番茄菌根生理分子機制的研究提供了理想的實驗體系。
　　 3、液體培養(yǎng)法收集櫻桃番茄Micr

5、o-Tom野生型和菌根侵染突變體(Myc-)m161的根系分泌物，通過高效液相色譜法檢測二者根系分泌物中物質(zhì)含量的差異。結果表明：在某相同條件下，某一相同洗脫時間，WT與m161根系分泌物中物質(zhì)有明顯不同。
　　 4、通過回補實驗將收集到的目標物質(zhì)加入到菌根侵染突變體( Myc-)m161的雙重培養(yǎng)體系中，檢測該物質(zhì)在AM真菌侵染宿主時的作用。結果表明：加入目標物質(zhì)的m161培養(yǎng)體系中，叢枝菌根（AM）真菌根內(nèi)球囊霉Glomus