四省區(qū)雞傳染性支氣管炎病毒M、N基因分子流行病學研究.pdf

1、本研究從浙江、安徽兩地大型養(yǎng)殖場或養(yǎng)殖戶發(fā)病或瀕死雞9份病料(氣管、腺胃、腎臟、盲腸扁桃體、輸卵管)在9-11日齡SPF雞胚盲傳2-8代，共分離9株病原。死亡雞胚表現(xiàn)出生長發(fā)育障礙，彌漫性出血，未死亡雞胚呈現(xiàn)典型的卷曲胚，尿囊液不凝集雞的外周血紅細胞，病原經RT-PCR鑒定為傳染性支氣管炎病毒。 采用RT-PCR方法擴增了我國山東、安徽、浙江、四川四個省區(qū)的32株IBV地方分離株的M基因和其中10株的N基因，并對其進行了克隆、序

2、列測定及同源性分析，構建了系統(tǒng)進化樹，闡明了本研究IBV分離株與疫苗株、國內外參考毒株之間的遺傳演化關系，探討了地方分離株的來源。 對IBV分離株M基因序列比對結果發(fā)現(xiàn)，32個毒株中25個毒株M基因ORF由678bp組成，而Australia“T”由669bp組成；ZJ981、IBV-J由672bp組成；JH051、IBV-W由681bp組成；JH06111、JH06011、JD071201由711bp組成。以H52、H120兩

3、個疫苗株M基因ORF225位氨基酸長度為參考，其他毒株與兩疫苗株M基因5’端長度差異情況為：Australia“T”在5’端缺失3個氨基酸，ZJ981、IBV-J在M基因5’端缺失2個氨基酸，JH051、IBV-W在M基因5’端有一個氨基酸的插入，JH06111、JH06011、JD071201在M基因5’端11位氨基酸處有10個正向重復序列的插入。IBV M基因除5’端前20位氨基酸有較大變異外，其他多處區(qū)域存在點突變，表明IBV M

4、基因存在不同程度的變異。 10株IBV分離株N基因的ORF均由1230bp組成，編碼序列長度為409個氨基酸組成的多肽，10株IBV分離株存在散在的點突變，沒有堿基的缺失和插入，M、N基因同源性及系統(tǒng)發(fā)育進化樹分析表明：大多數毒株M、N基因進化關系一致，而IBV-J、JH06111、ZJ981、IBV-W株M、N兩基因進化關系出現(xiàn)了差異，推測JH06111為-基因重組株，JH06011、JD071201、IBV-W、JH051有