山東半島地區(qū)不同來源的禽Ⅰ型副粘病毒毒力差異比較研究.pdf

1、本論文對山東半島地區(qū)的4株禽Ⅰ型副粘病毒強(qiáng)毒株進(jìn)行了分離，對其血清學(xué)、臨床毒力表現(xiàn)和分子生物學(xué)方面進(jìn)行了研究。 將4株地方強(qiáng)毒株經(jīng)絨毛尿囊腔接種10日齡雞胚，雞胚接種后36—72h雞胚全身出血，含病毒的尿囊液紅細(xì)胞凝集效價(jià)（HA）為1：160-1：640，并且能被ND標(biāo)準(zhǔn)陽性血清所抑制，不能被AI標(biāo)準(zhǔn)陽性血清所抑制。人工發(fā)病實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明3株雞源禽Ⅰ型副粘病毒屬于強(qiáng)毒株，鴿源禽Ⅰ型副粘病毒對雞不發(fā)病，對鴿則表現(xiàn)為強(qiáng)毒株。

2、為了探討山東半島地區(qū)NDV毒力分布情況，將分離獲得的其中3株NDV的雞胚平均致死時(shí)間（Mean death time，MDT）、1日齡雛雞腦內(nèi)致病指數(shù)（Intracerebral pathogenicity index，ICPI）和6周齡雞靜脈內(nèi)致病指數(shù)（Intravenous pathogenicity index，IVPI）進(jìn)行測定。NDV—PL（蓬萊）株、NDV—ZY（招遠(yuǎn)）株、NDV—LZ（萊州）株的MDT分別為63.23、60

3、、61.5，ICPI分別為0.9、1.83、1.5，IVPI分別為2.35、2.74、2.61，結(jié)果表明3株NDV中，NDV—LZ株的各項(xiàng)指標(biāo)均為強(qiáng)毒力病毒，NDV—ZY株和NDV—PL株除ICPI結(jié)果顯示為中等毒力病毒外，其余結(jié)果均顯示為強(qiáng)毒力病毒，表明這3株新城疫病毒毒株對雞有較強(qiáng)的致病力。 利用自己設(shè)計(jì)的引物和參考已發(fā)表的引物，通過一步法RT—PCR擴(kuò)增出三個(gè)毒株的479bp的片段和兩個(gè)毒株的497bp的片段，這兩個(gè)目的片

4、段含有F蛋白的酶切裂解位點(diǎn)。將目的片段在72℃加腺苷酸尾后，克隆至pGEM—T Easy載體中，構(gòu)建了相應(yīng)的重組質(zhì)粒，經(jīng)酶切與PCR鑒定后，送交測序并貯存基因。4株cDNA測序結(jié)果表明，各毒株的酶切裂解位點(diǎn)都符合強(qiáng)毒株的酶切裂解位點(diǎn)的序列，表明我們所分離的毒株都屬于強(qiáng)毒株。 針對F基因479bp和497bp片段，通過DNASIS軟件構(gòu)建了相應(yīng)的系統(tǒng)發(fā)育樹，系統(tǒng)發(fā)育分析表明山東半島地區(qū)禽Ⅰ型副粘病毒與歐美及中東地區(qū)基因群明顯分離，