中國(guó)柑桔潰瘍病菌遺傳多樣性分析及其防治藥劑篩選.pdf

1、柑桔潰瘍病(citrus canker)是由地毯草黃單胞桿菌柑桔致病變種(Xanthomonas axonopodispv．citri)引起的柑桔毀滅性病害，為國(guó)內(nèi)外重大檢疫對(duì)象，主要侵染蕓香科柑桔屬、枳屬及金柑屬植物。該病害主要分布在亞洲、非洲及美洲的30多個(gè)國(guó)家，約占生產(chǎn)柑桔國(guó)家和地區(qū)的三分之一，其中以亞洲發(fā)生最為普遍。 根據(jù)病原菌的地理分布和對(duì)寄主植物致病性不同，可將柑桔潰瘍病菌分為5個(gè)菌系。Vauterin根據(jù)病菌致病性

2、、寄主?；院虳NA雜交同源性的差異，將其分為柑桔、枳殼和枳柚3個(gè)致病型，分別為X． axonopodis pv．citri致病型Ⅰ，即A菌系；X． axonopodis pv．a(chǎn)urantifolia致病型Ⅱ，即B、C、D菌系和X． axonopodis pv．citrumelo致病型Ⅲ，即E菌系。近期在佛羅里達(dá)州發(fā)現(xiàn)一新菌系，被暫定為Aw菌系。柑桔潰瘍病在我國(guó)廣東、廣西、福建、江西、浙江、湖南、云南、貴州等柑桔種植省(區(qū))發(fā)生較普遍

3、，在四川、湖北、重慶等省(市)有局部零星分布。國(guó)內(nèi)研究者分別對(duì)四川、福建、廣西3省的柑桔潰瘍病菌進(jìn)行了形態(tài)學(xué)、生理生化及致病性等方面研究，皆認(rèn)為屬于A菌系。 本研究對(duì)采自我國(guó)9個(gè)省(區(qū))柑桔潰瘍病樣品進(jìn)行病菌分離及接種方法優(yōu)選，同時(shí)對(duì)病菌DNA抽提方法進(jìn)行篩選比較，然后對(duì)病菌DNA進(jìn)行重復(fù)片段PCR基因指紋分析(Rep—PCR)，以確定菌株的遺傳多樣性。針對(duì)較新的化學(xué)和生物藥劑進(jìn)行室內(nèi)毒力和田間藥效的篩選，為進(jìn)一步深入研究我國(guó)柑

4、桔潰瘍病菌菌系及其有效防治奠定一定基礎(chǔ)，取得的主要結(jié)果如下。 1．比較了12種不同的病菌分離用消毒方式，發(fā)現(xiàn)70％酒精消毒9s左右效果最佳，污染小，目標(biāo)病原菌致病性無退化，經(jīng)離體葉片接種后易分離得到目標(biāo)菌株。 2．首次應(yīng)用微波法提取柑桔潰瘍病DNA并加以優(yōu)化，具有用時(shí)少、提取方便、DNA提取純度較高等優(yōu)點(diǎn)，用引物XCF/XCR PCR可很好的擴(kuò)增出220 bp特異性條帶。 3．比較了微量抽提、高鹽抽提、菌液裂解、

5、SDS、微波抽提等5種柑桔潰瘍病菌DNA提取方法，微量抽提法和高鹽抽提法抽提DNA顏色較黃，易有雜質(zhì)，SDS法及微波法抽提的為無色。用XCF/XCR引物PCR檢測(cè)，微量抽提法和高鹽抽提法皆是直接抽提病斑，微量抽提法效果較好；菌液裂解法、SDS、微波抽提皆是抽提分離純化后的病菌菌株，三者比較，SDS抽提效果最好，微波法最適用于引物XCF/XCR檢測(cè)，微量抽提法及SDS適用于引物JYFS/JYR5檢測(cè)。 4．比較了引物XCF/XCR

6、和JYFS/JYR5的靈敏度，結(jié)果表明，引物XCF/XCR的靈敏度可以達(dá)到2.1×10-14μg/mL以上，優(yōu)于引物JYFS/JYR5的靈敏度(21μg/mL)。 5．對(duì)來自9個(gè)省(區(qū))的病菌DNA進(jìn)行Rep—PCR分析，結(jié)果表明引物(GTG)5、ITS、REP的擴(kuò)增效果不理想，引物BOX和ERIC擴(kuò)增的多態(tài)性譜帶較多，而引物BOX優(yōu)于引物ERIC。綜合Box—PCR及Eric—PCR聚類分析，遺傳距離為0.5時(shí)，云南、貴州、廣

7、西、廣東、湖南、江西、福建的部分菌株與A菌系標(biāo)準(zhǔn)菌株的遺傳距離較小，推測(cè)這些省份的菌株均為A菌系。云南、浙江、廣東(寄主為紐荷爾)、湖北的菌株遺傳距離比較大。云南省內(nèi)部菌株之間遺傳距離較大，這可能由于云南復(fù)雜的地理環(huán)境及品種調(diào)運(yùn)引起。 6．對(duì)24種藥劑進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，噻霉酮、農(nóng)用硫酸鏈霉素及溴菌睛的效果較好，噻霉酮的毒力優(yōu)于農(nóng)用硫酸鏈霉素和溴菌睛。選擇10種潛力較好藥劑進(jìn)行田間藥效試驗(yàn)，結(jié)果表明春雷霉素400倍液、農(nóng)用鏈霉素1