轉(zhuǎn)MiARF2基因?qū)煵莺蛿M南芥不定根形成的影響.pdf

1、MiARF2基因是從芒果子葉橫切段的不定根形成所克隆的生長(zhǎng)素反應(yīng)因子ARF2類基因，已證明它與芒果子葉切段不定根的形成有關(guān)，為上調(diào)表達(dá)或誘導(dǎo)表達(dá)基因。本文研究轉(zhuǎn)MiARF2基因的煙草和擬南芥不定根發(fā)生的能力變化，分析MiARF2基因在不定根形成過程中的生物學(xué)功能。主要的研究結(jié)果如下： 1.經(jīng)過Basta(6 mg/L)的抗性篩選及葉片PCR分析，從一批待檢測(cè)的擬轉(zhuǎn)MiARF2基因煙草株系中初步篩選出3個(gè)株系(B1、B2、B3株系

2、)，并通過Southern雜交證明外源MiARF2基因已整合到煙草基因組中，且在3個(gè)轉(zhuǎn)基因煙草株系中均為單位點(diǎn)插入。RT—PCR證明外源MiARF2基因在轉(zhuǎn)基因株系中均可正常轉(zhuǎn)錄。 2.以轉(zhuǎn)MiARF2基因煙草三個(gè)株系的T1代種子在光照條件下萌發(fā)并培養(yǎng)30天左右，生長(zhǎng)至約5 cm的無菌苗的葉片切塊(1 cm×1 cm)為外植體，接種至不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在28℃光照條件下培養(yǎng)，待不定芽高度為1 cm左右時(shí)，將其接種于生根培養(yǎng)基中

3、，對(duì)不定根發(fā)生能力進(jìn)行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)入MiARF2基因的煙草其第一條不定根出現(xiàn)時(shí)間早于野生型約1天。生根培養(yǎng)15天不定根數(shù)量相對(duì)于野生型沒有顯著變化。但生根培養(yǎng)30天后，轉(zhuǎn)MiARF2基因的煙草3個(gè)株系的不定根根長(zhǎng)比野生型(對(duì)照)分別增加了29.3％、30.2％、30.4％，達(dá)到顯著效果(n=12，P<0.05)；而其不定根的干重也比對(duì)照的分別增加31.0％、33.0％、35.7％(n=12,P<0.05)。 3.以轉(zhuǎn)MiA

4、RF2基因的擬南芥三個(gè)株系的T4代自交純合子為測(cè)試樣本，野生型擬南芥(Arabidopsis thaliana，Col)為對(duì)照，將種子在光照條件下萌發(fā)，分別切取種子萌發(fā)12-14天的植株的下胚軸(長(zhǎng)約5 mm)，接種于含0.5 mg/L IBA的MS培養(yǎng)基中，28℃黑暗培養(yǎng)12天。經(jīng)測(cè)量及統(tǒng)計(jì)分析后得出的結(jié)果為：轉(zhuǎn)基因擬南芥與野生型株系不定根數(shù)均為1-2根，轉(zhuǎn)基因擬南芥的不定根比野生型不定根長(zhǎng)26.7％左右(n=28，P＜0.05)。