丹參不定根組織培養(yǎng)的研究.pdf

1、本文以丹參幼葉為外植體,經(jīng)愈傷組織階段誘導不定根,系統(tǒng)探討了不同理化因子對丹參不定根懸浮培養(yǎng)的影響,為丹參大規(guī)模不定根培養(yǎng)、次生代謝物的生產(chǎn)提供了一定的理論依據(jù)和技術(shù)支持.實驗結(jié)果如下: (1) 確定了丹參不定根誘導和增殖培養(yǎng)基為MS+IBA 2 mg·L<'-1>+KT0.2mg·L<'-1>. (2) 以MS為基本培養(yǎng)基,改變培養(yǎng)基鹽強度,發(fā)現(xiàn)高鹽強度利于不定根生長,低鹽強度促進丹參酮HA和原兒茶醛合成. (

2、3) 與黑暗培養(yǎng)相比,光照培養(yǎng)的不定根生長旺盛,丹參酮HA和原兒茶醛含量較高. (4) 培養(yǎng)基初始pH為4.5、6.5和7.0時不定根生長較快,pH為5.5時丹參酮ⅡA含量最高,為10.29 lμg·g<'-1>,pH為6.0時原兒茶醛含量最高,為251.56μg·g<'-1>. (5) 接種量為2.5﹪時培養(yǎng)效果較好,不定根增殖了2.88倍,丹參酮ⅡA含量為28.74 μg·g<'-1>,原兒茶醛含量為295.11μg

3、<'-1>. (6) 碳源、氮源、磷源是丹參不定根培養(yǎng)必需的.以蔗糖為碳源,添加30 g·L<'-1>蔗糖培養(yǎng)20天不定根增殖倍數(shù)最高,60 g·L<'-1>蔗糖最適合丹參酮ⅡA合成,低濃度蔗糖利于原兒茶醛合成.間歇添加蔗糖兩階段培養(yǎng)25天,不定根增殖率和丹參酮ⅡA含量分別是對照的2.3倍和2.4倍.培養(yǎng)基NH<'+><,4>和NO<'-><,3>總濃度保持60mmol·L<'1>,NH<'+><,4>/NO<'-><,3>為1

4、:4、1:4、1:1時分別得到最大的不定根增殖倍數(shù)、丹參酮ⅡA和原兒茶醛含量.改變培養(yǎng)基KH<,2>PO<,4>濃度,丹參不定根生長均比對照旺盛,但高濃度KH<,2>PO<,4>抑制了丹參酮ⅡA合成. (7) 1倍Fe<'2+>、1倍Mn<'2+>、2.0倍Cu<'2+>和1.5倍Mg<'2+>利于不定根增殖；低濃度Zn<'2+>、Cu<'2+>、Mg<'2+>、較高濃度Fe<'2+>和Mn<'2+>利于丹參酮ⅡA合成；Cu<'

5、2+>和Zn<'2+>抑制原兒茶醛合成,1倍Fe<'2+>和Mg<'2+>可滿足原兒茶醛的合成,較高濃度Mn<'2+>利于原兒茶醛的合成. (8) 培養(yǎng)基五種有機物之間的相互作用對丹參不定根生長起很大作用；甘氨酸是合成丹參酮IIA必需的成分:僅缺少肌醇、甘氨酸、VB<,1>、VB<,6>其中一種時,原兒茶醛合成均受阻. (9) 培養(yǎng)第0天飼喂前體化合物,發(fā)現(xiàn)添加1.0mmol·L<'-1>乙酸鈉、0.5mmol·L<'-