大連高爾夫球場主要草坪病害生防木霉菌株的篩選.pdf

1、草坪業(yè)在我國屬于新興行業(yè),發(fā)展迅速,國內(nèi)許多城市已經(jīng)意識到草坪面積的大小直接反映一個城市的現(xiàn)代化水平。隨著我國草坪建植面積的增加,草坪病害問題越發(fā)突出,已經(jīng)逐漸成為我國草坪業(yè)發(fā)展的主要制約因素。木霉菌可以作為生防因子來防治常見的草坪病害,它對常見的草坪病害病原菌具有良好的拮抗作用。其拮抗作用主要表現(xiàn)在對生存空間和營養(yǎng)物質(zhì)的競爭作用、重寄生作用、抗生作用、誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗性、激發(fā)植物的防御機制以及調(diào)節(jié)根系微環(huán)境幾個方面。本文針對草坪上2種常

2、見的真菌病害展開了生防研究,具體研究結(jié)果如下:
　　 2009年4～9月,分別對大連3個地點的草坪土壤進行樣品采集,共采集土壤樣品45份。通過平板稀釋法在孟加拉紅培養(yǎng)基上進行真菌的分離培養(yǎng),共分離出78株木霉菌(Trichoderma spp.),經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定分別屬于:哈茨木霉(T.harzianum)、鉤狀木霉(T.hamatum)、棘孢木霉(T.asperellum)、漸綠木霉(T.viridescens)、黃綠木霉(T.a

3、ureoviride)、深綠木霉(T.atroviride)、綠色木霉(T.viride)、綠木霉(T.virens)8個種；同時,從草坪枯萎病和褐斑病病草根部分離得到2株病原菌,經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定分別是:尖孢鐮孢菌(Fusarium oxysporum)和立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)。分別以78株木霉菌和2株病原菌做供試菌株,在PDA平板上進行對峙試驗,試驗共篩選出15株拮抗作用較好的木霉菌。采用微型電鉆研磨法分別提取

4、15株木霉菌的基因組DNA,以rDNA-ITS作為分子標記進行PCR擴增、測序,測序結(jié)果登陸NCBI網(wǎng)站進行Nucleotide Blast分析和鑒定,并用MEGA軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,對不同木霉菌之間的親緣關(guān)系進行分析。分子鑒定結(jié)果顯示這15株木霉菌分別為:鉤狀木霉(T.hamatum)4株、棘孢木霉(T.asperellum)4株、漸綠木霉(T.viridescens)1株、黃綠木霉(T.aureoviride)1株、深綠木霉(T.a

5、troviride)3株、綠色木霉(T.viride)1株、綠木霉(T.virens)1株,與之前的形態(tài)學(xué)鑒定相符合。
　　 對15株木霉菌中拮抗效果最好的木霉Th12菌株,采用單因素正交試驗進行液體發(fā)酵條件的優(yōu)化。試驗結(jié)果表明,木霉Th12菌株的最適發(fā)酵條件為:以葡萄糖為碳源,蛋白胨為氮源的培養(yǎng)液C；培養(yǎng)溫度為25℃,培養(yǎng)基初始pH為6；接菌量為0.8ml；裝瓶量為50ml；搖床轉(zhuǎn)速為180r／min,發(fā)酵培養(yǎng)3天。在該液體發(fā)