朗德鵝肝臟脂平衡調(diào)節(jié)的初步研究.pdf

1、從分子水平上篩選影響鵝肥肝性狀的主效基因，并在早期選擇有較大產(chǎn)肝潛力的朗德鵝是迅速提高鵝產(chǎn)肝性能和朗德鵝產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟(jì)效益的方法之一。然而朗德鵝肥肝性狀受眾多基因和信號途徑的調(diào)控，難以確定控制鵝肥肝性狀的主效基因，因此從信號通路和基因表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的角度進(jìn)行分析將是揭示鵝肥肝形成的分子機(jī)制的有效途徑。
　　 針對朗德鵝肥肝性狀的特點，文章通過圖論的方法從整體上把握肝臟脂平衡的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，然后尋找網(wǎng)絡(luò)中具有整體調(diào)節(jié)作用的信號通路，并從試驗的

2、角度分析填飼造成網(wǎng)絡(luò)中重要節(jié)點和脂代謝相關(guān)基因的表達(dá)變化。而對于圖論發(fā)現(xiàn)的調(diào)控通路也必須通過試驗的方法驗證和分析。
　　 根據(jù)原始的研究文獻(xiàn)、綜述及分子生物學(xué)數(shù)據(jù)庫，將分子實體作為頂點，分子實體名稱對應(yīng)標(biāo)記分子網(wǎng)絡(luò)中的分子實體，邊對應(yīng)于分子實體間的關(guān)系，對分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)資料進(jìn)行收集，并構(gòu)建對應(yīng)的鄰接矩陣。然后將原始各個鄰接矩陣綜合為分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)綜合鄰接矩陣。
　　 根據(jù)鄰接矩陣A，通過計算R=A+A2+A3+…+An，得到

3、可達(dá)矩陣。然后根據(jù)可達(dá)矩陣所研究分子所在的行和列的數(shù)據(jù)資料來判斷分子間的調(diào)節(jié)與被調(diào)節(jié)關(guān)系。將分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的鄰接矩陣Spath進(jìn)行k次冪來判斷肝臟脂代謝核心相關(guān)分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的分子的上游與下游信號分子間的調(diào)控關(guān)系、路徑長度及路徑數(shù)。依據(jù)綜合鄰接矩陣，通過Matlab軟件繪制了以核心基因為基礎(chǔ)的肝臟脂代謝調(diào)控圖。
　　 填飼后朗德鵝的肝重、腹脂重、肝重指數(shù)和體重顯著增加。通過CT分析發(fā)現(xiàn)對照組肝脾比值大于1，而填飼組肝脾比值呈負(fù)數(shù)，

4、與人的脂肪肝結(jié)果分析類似.在血清生化指標(biāo)方面，填飼組朗德鵝血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、甘油三酯和H-膽固醇與對照組相比差異極顯著；膽堿脂酶顯著高于對照組。通過組織切片分析發(fā)現(xiàn)：填飼處理后，朗德鵝肝臟細(xì)胞脹大，并且細(xì)胞質(zhì)內(nèi)充滿大小不等的脂泡。通過氣相色譜法測定了朗德鵝肝臟的脂肪酸組分發(fā)現(xiàn)：填飼可以降低朗德鵝肝臟中飽和脂肪酸、C18:2、C20:4、PUFA、SFA/UFA的含量、PUFA/UFA和PUFA/MUFA的值；提高M(jìn)UFA、C18:1、UF

5、A的含量和MUFA/UFA的值(P＜0.01)。
　　 用熒光實時定量PCR法檢測了填飼對脂生成相關(guān)基因和相關(guān)分子mRNA表達(dá)的影響。結(jié)果顯示：與對照組相比，填飼可以顯著提高朗德鵝肝臟中ACCα、PPARα、aP2、LXRα、PPARγ、Spot14α、Spot14β、C/EBPα、C/EBPβ、GH基因mRNA的表達(dá)水平。肝臟組織中ACCα、LXRα基因的表達(dá)量與血清TG含量呈極顯著正相關(guān)。而肝臟組織中aP2、LXRα、PPA

6、Rγ基因的表達(dá)量與肝重指數(shù)呈極顯著相關(guān)(P＜0.01)。填飼可以降低SREBP1c基因mRNA的表達(dá)量(P＜0.05)。肝臟組織中SREBP1c基因的表達(dá)量與肝重指數(shù)呈極顯著相關(guān)(P＜0.01)，與血清TG成負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。
　　 T3處理可以顯著提高體重、肝重(P＜0.01)，添加甜菜堿后可以逆轉(zhuǎn)這種變化。與對照組和填飼組相比，T3處理可以顯著提高血清Che, HDL和LDL的濃度，但是添加甜菜堿不能夠逆轉(zhuǎn)這種變化。T

7、3處理組空泡數(shù)量明顯減少，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)脂滴增加，肝細(xì)胞膨脹。添加甜菜堿后，空泡數(shù)量進(jìn)一步減少，肝細(xì)胞內(nèi)脂滴比較均勻，細(xì)胞結(jié)構(gòu)的變化得到有效的逆轉(zhuǎn)。相對于填飼組，T3處理組顯著提高肝臟中不飽和脂肪酸的含量(P＜0.05)，并且添加甜菜堿后可以逆轉(zhuǎn)這種變化。
　　 相對于填飼組，T3處理可以顯著提高ACCα基因的表達(dá)量，添加甜菜堿后可逆轉(zhuǎn)T3處理對ACCα基因表達(dá)量的影響。相對于填飼組，T3處理可以顯著降低PPARγ、PPARα、C/E

8、BPβ、LXRα和GH基因mRNA的表達(dá)量(P＜0.01)，顯著提高aP2基因mRNA的表達(dá)水平，添加甜菜堿后可逆轉(zhuǎn)T3處理對GH和aP2基因表達(dá)量的影響(P＜0.05).肝臟組織中ACCα，Spot14α基因的表達(dá)量與血清TG呈極顯著相關(guān)。肝臟中SREBP1c基因mRNA表達(dá)量與肝重指數(shù)呈極顯著負(fù)相關(guān)，與血清TG呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。
　　 相對于填飼組，添加甜菜堿后肝重和肝重指數(shù)顯著增加，腹脂重降低，血清中Che,H

9、DL, ALT濃度顯著增加(P＜0.01)，而TG和LDL濃度沒有受到甜菜堿的影響。甜菜堿處理后，空泡數(shù)量明顯減少，脂滴沉積分布均勻，數(shù)量較多。然而添加甜菜堿對脂肪酸組分沒有影響。相對于填飼組，甜菜堿處理可降低C/EBPβ、PPARα、Spot14β、PPARγ和LXRαmRNA的表達(dá)水平(P＜0，01)。而甜菜堿處理后可以顯著提高Spot14α基因mRNA的表達(dá)。
　　 Spot14αcDNA全序列長792bp，與鴨比有87％

10、的同源性，并已提交到基因庫中，序列號為EU710582，編碼128個氨基酸，與鴨比有84％的同源性.序列中有2個CpG島，一個位于61～375區(qū)，另一個位于433～645區(qū).移碼突變是由于399～400位之間插入一個C或T引起的，其可導(dǎo)致亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)的丟失，從而引起Spot14α同源二聚體的形成。
　　 對Spot14α基因轉(zhuǎn)錄起始位點（-8+374）區(qū)域的33個CpG位點進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)：對照組該區(qū)域69.6％的位點甲基化，而經(jīng)