茄子青枯病生防菌株的篩選、鑒定及其微生物有機(jī)肥的生物效應(yīng)研究.pdf

1、茄子青枯病是由茄科勞爾氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的世界范圍內(nèi)毀滅性土傳病害之一,該病害的防治方法已經(jīng)成為茄子生產(chǎn)的研究熱點(diǎn)。然而,對茄子青枯病的防治目前尚無理想的化學(xué)藥劑和抗病品種,一些栽培管理措施也只能起到局部的控制作用,因此加強(qiáng)該病的防治迫在眉睫,生物防治作為綜合防治茄子青枯病的措施之一,對生態(tài)平衡和可持續(xù)農(nóng)業(yè)的發(fā)展具有特別重要的意義。本文從茄子青枯病生防菌株的分離篩選鑒定及其制成的微生物有機(jī)肥料對茄子

2、青枯病的生防效果及其生防機(jī)理等方面進(jìn)行了較系統(tǒng)研究,主要結(jié)果如下:
　　 從茄子種植區(qū)的健康茄子植株的根際與土體土壤中分離、初篩獲得拮抗茄科勞爾氏菌的菌株14株,再經(jīng)過復(fù)篩,最終得到一株拮抗活性較強(qiáng)的菌株Ⅱ-36.該菌株能抑制多種病原真菌,具有廣譜拮抗效果。根據(jù)形態(tài)特征觀察、常規(guī)生理生化特性及16SrDNA序列分析,確定該拮抗菌株為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。培養(yǎng)條件優(yōu)化結(jié)果表明:在培養(yǎng)溫度為30℃、初始

3、pH為7.0、碳源為蔗糖、氮源為蛋白胨或谷氨酸時(shí),菌株Ⅱ-36可達(dá)到最大的生長量.
　　 按照20％(V/W)的比例將拮抗菌發(fā)酵液接種到等比例混合的豬糞堆肥和氨基酸有機(jī)肥中發(fā)酵4天,制得微生物有機(jī)肥(BOF)。利用微生物有機(jī)肥進(jìn)行了兩次盆栽試驗(yàn).
　　 第一次盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明,微生物有機(jī)肥能顯著增加茄子苗期的生物量,提高根系活力。兩種肥料都能抑制茄子青枯病(防病效果分別為96%和91%),植株葉片中CAT(過氧化氫酶)、

4、POD(過氧化物酶)和SOD(超氧化物歧化酶)酶活性顯著提高,而MDA(丙二醛)含量顯著下降,葉片中CAT酶活性分別比對照增加了25%和23.7%,POD酶活性分別增加了99.5%和93.6%,SOD酶活性分別增加了32.7%和29.8%,MDA含量分別比對照降低了29.5%和26.3%.此外,根際土壤的真菌、放線菌數(shù)量顯著提高,細(xì)菌數(shù)量增加幅度不大,青枯勞爾氏菌數(shù)量顯著減少。其中BI0-36比BI0-23的防治效果最好。
　　

5、 第二次盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明,營養(yǎng)缽育苗期和盆栽期都施用微生物有機(jī)肥能顯著降低茄子青枯病的發(fā)病指數(shù),迅速降低青枯菌的數(shù)量,延緩拮抗菌的數(shù)量的降低。第40 d時(shí),BI0+B10組中的拮抗菌數(shù)量為CK+CK組的3.91倍,病原菌數(shù)量比CK+CK組降低了77.5%。
　　 經(jīng)搖瓶振蕩培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),篩選出了枯草芽抱桿菌Ⅱ-36產(chǎn)抗菌活性物質(zhì)的最佳培養(yǎng)條件即:最佳培養(yǎng)基為LB液體培養(yǎng)基,最佳發(fā)酵條件為:pH8.0,30℃～34℃,裝液量50mL,

6、210～240r/min,此時(shí)對茄子青枯病菌的抑菌活性最大,即產(chǎn)生的活性物質(zhì)最多.
　　 通過硫酸銨沉淀得出最佳硫酸銨飽和度為90%,該抑菌蛋白質(zhì)具有較好的熱穩(wěn)定性,在100℃、121℃處理30min,其抑茵活性仍保持為59.2%、46.8%。抑茵蛋白在中性和堿性環(huán)境下比較穩(wěn)定,在pH9、pH11時(shí)其抑菌活性仍保持為92.1%、63.8%.胃蛋白酶、胰蛋白酶對粗提液兒乎沒有影響。Ⅱ-36菌株分泌的抗菌蛋白能減少茄子青枯病菌分泌胞