丁酸鈉處理對奶牛成纖維細胞周期、活性、凋亡和組蛋白乙?；挠绊?pdf

1、體細胞核移植技術(shù)是動物胚胎工程中一種比較重要的技術(shù),對于體外胚胎的大量生產(chǎn)具有十分重要的意義,但是就目前的發(fā)展狀況來看,這項技術(shù)的成功率還比較低,不能用于實際的生產(chǎn)。其中造成這樣的結(jié)果的一個比較重要的因為就是供體細胞核的不完全重編程。所以本實驗從供體組蛋白乙?；胧?研究組蛋白乙?；瘜τ谥鼐幊痰挠绊憽ａ槍σ陨系膯栴},本實驗以第6代牛胎兒成纖維細胞作為供體細胞,以牛卵母細胞作為受體進行研究,得到如下結(jié)果與結(jié)論:
　　 1.用3 m

2、mol/L丁酸鈉(NaBu)分別處理供體細胞0、48和72、96h,通過核移植檢測克隆胚胎發(fā)育率,并應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)檢測處理之后的細胞的組蛋白H3K9、14乙酰化水平。結(jié)果顯示:隨著NaBu處理時間的延長,供體細胞組蛋白H3K9、14乙酰化水平不斷增高；用NaBu處理之后的成纖維細胞就行核移植,以3mmol/L NaBu處理供體細胞48h的克隆胚的囊胚發(fā)育率顯著高于未處理組(32.5％vs22％,p<0.05)。結(jié)論:3 mmo

3、l/LNaBu處理供體細胞48h更易使重編程的過程發(fā)生,顯著提高了克隆胚的體外發(fā)育能力,初步證實NaBu是通過提高供體細胞組蛋白乙?；絹泶龠M供體細胞重編程。
　　 2.采用組蛋白乙?；敢种苿?NaBu)處理成纖維細胞,除了其對細胞組蛋白乙?；杏绊懼?考慮其對細胞特性的一些影響。嘗試著確定NaBu的最佳處理濃度和最佳處理時間,使其既不影響體細胞生物學特性,又可提高供體細胞組蛋白乙?；癄顟B(tài)的方法,從而提供一種提高體細胞克隆

4、動物效率的方法。實驗中用NaBu分別處理奶牛成纖維細胞0、48、72、96h,采用流式細胞儀檢測細胞周期及細胞凋亡的情況,用MTT法檢測NaBu對成纖維細胞活性的影響。結(jié)果顯示:處理組細胞形態(tài)發(fā)生了改變,不規(guī)則生長,細胞之間接觸不緊密,還出現(xiàn)脫壁死亡的現(xiàn)象。經(jīng)3 mmol/LNaBu處理的細胞在G0/G1期的百分比與未經(jīng)處理的對照組相比略有降低；從瓊脂糖凝膠電泳圖譜上可見從72h開始出現(xiàn)拖帶現(xiàn)象,說明細胞的DNA開始有斷裂。用Annex