我國(guó)杏核心種質(zhì)的構(gòu)建.pdf

1、我國(guó)是世界栽培杏的原生起源中心之一，其擁有的杏種質(zhì)資源十分豐富，全世界杏品種有3000余個(gè)，其中我國(guó)杏有9個(gè)種，13個(gè)變種，約2000個(gè)品種和類型。為了更好地保存、評(píng)價(jià)和利用這些種質(zhì)資源，我們?cè)诙嗄陙?lái)杏資源收集、評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)上，利用18個(gè)形態(tài)學(xué)和農(nóng)藝學(xué)性狀數(shù)據(jù)對(duì)收集到的1501份杏品種進(jìn)行了取樣策略研究，并結(jié)合SSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)杏種質(zhì)資源的遺傳多樣性進(jìn)行了分析，構(gòu)建了杏的核，心種質(zhì)，并對(duì)核心種質(zhì)的有效性進(jìn)行了檢測(cè)，研究結(jié)果如下：

2、　　 1.杏品種初級(jí)核心種質(zhì)取樣策略研究表明，最佳總體取樣比例為100％，以按栽培區(qū)分組結(jié)合對(duì)數(shù)比例取樣為構(gòu)建杏初級(jí)核心種質(zhì)的最佳取樣方案。利用此取樣策略從1501份杏品種中提取150份作為初級(jí)核心種質(zhì)，對(duì)其代表性進(jìn)行檢測(cè)表明所構(gòu)建的初級(jí)核心種質(zhì)能夠很好地代表杏種質(zhì)資源的遺傳多樣性。
　　 2.以鮮食杏品種‘大巴達(dá)’為試材，研究了杏SSR-PCR反應(yīng)體系的主要因子對(duì)擴(kuò)增結(jié)果的影響，并進(jìn)行了體系驗(yàn)證。優(yōu)化后的反應(yīng)體系為：總體積2

3、0μL，1xPCRbuffer、2.0mM/LMg2+、0.25mM/LdNTP、0.20μM/LPrimer、3ng/μL模板DNA和0.05U/μLTaq酶。瓊脂糖電泳檢測(cè)的DNA多態(tài)性不如變性聚丙稀酞胺凝膠豐富。利用32個(gè)杏品種驗(yàn)證此反應(yīng)體系，6％的變性聚丙稀酰胺凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果顯示：擴(kuò)增產(chǎn)物在184-267bp之間，不同品種間DNA譜帶多態(tài)性豐富，且反應(yīng)體系的穩(wěn)定性和可重復(fù)性好。
　　 3.針對(duì)SSR引物的獲得比較困難

4、，杏本身開(kāi)發(fā)的SSR引物數(shù)量有限，本文以5個(gè)杏品種的基因組DNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對(duì)來(lái)自薔薇科植物的106對(duì)引物進(jìn)行初步篩選，采用1％瓊脂糖凝膠檢測(cè)結(jié)果，從中篩選出全部有擴(kuò)增產(chǎn)物的引物47對(duì)，接下來(lái)應(yīng)用6個(gè)杏品種對(duì)初選的47對(duì)引物進(jìn)行復(fù)篩，PCR擴(kuò)增后，采用6％變性聚丙烯酰胺凝膠檢測(cè)，最后得到條帶清晰、多態(tài)性好的引物22對(duì)，擴(kuò)增片段分別為6-10條不等，多態(tài)性百分率為50％-88％。
　　 4.以杏的初級(jí)核心種質(zhì)為研究材料

5、，利用SSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)杏初級(jí)核心種質(zhì)的遺傳多樣性進(jìn)行分析。結(jié)果表明：利用篩選出的22對(duì)多態(tài)性高、特異性好的SSR引物，檢測(cè)到196個(gè)等位基因，平均每個(gè)位點(diǎn)的等位基因數(shù)為8.9；各栽培區(qū)的遺傳多樣性大小順序?yàn)椋喝A北溫帶杏區(qū)>東北寒帶杏區(qū)>西北干旱帶杏區(qū)>西南高原杏區(qū)>廣泛分布品種>熱帶-亞熱帶杏區(qū)。聚類分析表明：150份供試材料在相似系數(shù)為0.27處分為6類，各栽培區(qū)品種沒(méi)有明顯的分開(kāi)，存在交叉現(xiàn)象。
　　 5.為構(gòu)建杏核心種

6、質(zhì)，通過(guò)對(duì)150份杏初級(jí)核心種質(zhì)的形態(tài)農(nóng)藝性狀（MOR）數(shù)據(jù)和SSR等位基因數(shù)據(jù)的分析，研究了四種取樣方法下各取樣比例的多樣性指數(shù)、保留比例及各頻率段的等位基因的丟失比例，確定了核心種質(zhì)構(gòu)建的最佳取樣方案，并利用數(shù)量性狀對(duì)構(gòu)建的核心種質(zhì)的代表性進(jìn)行分析。結(jié)果表明，聚類取樣的方法優(yōu)于隨機(jī)取樣，在80％的取樣比例下SSR+MOR聚類取樣效果最好，利用此方法構(gòu)建的核心種質(zhì)共包括120份材料，保留了初級(jí)核心種質(zhì)100％的SSR等位基因和原始種質(zhì)