胭脂魚幼魚適宜蛋白水平及中草藥對其非特異性免疫機能的影響.pdf

1、本文以胭脂魚（Myxocyprinus asiaticus）幼魚為試驗對象，研究涉及營養(yǎng)學和免疫學兩部分，第一部分探討了胭脂魚幼魚飼料中適宜的蛋白質需求量，第二部分探討了3種中草藥提取物的組方（包括蜂膠配淫羊藿、黃芪配甘草、陳皮）作為免疫增強劑對胭脂魚幼魚非特異性免疫力和抗病力的影響。主要研究結果如下：
　　 （1）飼料蛋白水平對胭脂魚幼魚生長和體組成的影響：以體重（13.5士1.1）g的胭脂魚為試驗對象，以白魚粉作為主要蛋白源

2、，按6個蛋白質水平梯度（30％、34％、38％、42％、46％、50％）設計等能的飼料，進行8周的飼養(yǎng)試驗，探討胭脂魚幼魚適宜的蛋白質需求量。結果顯示，飼料蛋白質水平對增重率（WG）和特定生長率（SGR）的影響基本均呈先升后降的變化趨勢，WG和SGR最大值均出現(xiàn)在蛋白質含量46％的飼料組，分別為（187.70士8.01）％和（1.89士0.11）％/天，與蛋白質含量42％及以下的飼料組比較有顯著性差異（P<0.05），與蛋白質含量50％

3、的飼料組間沒有顯著差異；根據(jù)折線模型計算出折點對應SGR的值為1.87％/天，對應的飼料蛋白質含量為46.5％；各組成活率（Survival）變化范圍在71％～90％，不同飼料蛋白質含量對成活率無明顯影響；隨飼料蛋白質含量的增加，飼料系數(shù)（FCR）大體呈下降的趨勢，最小值出現(xiàn)在46％飼料組；蛋白質效率（PER）和蛋白質利用率（PPV）均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，最大值均出現(xiàn)在46％飼料組；魚體和肌肉粗蛋白的含量均隨飼料蛋白質水平的升高而呈

4、顯著增加（P<0.05）；隨飼料蛋白質含量的增加，肥滿度（CF）、肝體指數(shù)（HSI）、臟體指數(shù)（VSI）均呈大體升高的趨勢。結果表明，本試驗條件下，胭脂魚幼魚飼料適宜蛋白質含量為46.5％。
　　 （2）蜂膠配淫羊藿對胭脂魚幼魚非特異性免疫機能和抗病力的影響：醇提法制備中草藥蜂膠提取物（總黃酮含量約37.1％）和淫羊藿提取物（總黃酮含量約42.6％），二者按生藥重量比3：1合用，按質量分數(shù)0％（對照組）、0.1％、0.5％和1.

5、0％添加于基礎飼料成鰻粉中，飼喂胭脂魚幼魚，分別于第10 d、20 d、30 d、40 d、50 d采樣，不連續(xù)密度梯度分離法制備頭腎巨噬細胞，檢測細胞免疫指標：采用中性紅吞噬試驗檢測吞噬活性，流式細胞術檢測呼吸爆發(fā)活力；取血清，檢測體液免疫指標：利用溶壁微球菌（Micrococcus lysoleikticus）檢測溶菌酶活性，利用嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）檢測殺菌活性，利用兔血紅細胞檢測替代補體溶血活性

6、（ACH50）。結果顯示，蜂膠配淫羊藿O．5％劑量組在第40 d和第50 d、1.0％劑量組在第30 d的頭腎巨噬細胞吞噬活性均顯著高于對照組（P<0.05）；0.5％劑量組在第30 d和40 d的頭腎巨噬細胞呼吸爆發(fā)活力與對照組比較均有顯著性升高（P<0.05）；0.1％劑量組在第40 d和第50 d、0.5％劑量組在第20 d和第40 d、1.0％劑量組在第10 d的血清溶菌酶活性均顯著高于對照組（P<0.05）；第40 d，0.5

7、％劑量組的殺菌活性與對照組比較有顯著升高（P<0.05）；蜂膠配淫羊藿對ACH50則無明顯影響。飼喂50 d后，各組隨機取20尾魚，用A．hydrophila腹腔注射進行攻毒試驗，探討蜂膠配淫羊藿對胭脂魚幼魚抗病力的影響，結果顯示1周內對照組的累積死亡率為75％，1.0％和0.1％劑量組的累積死亡率分別為45％和55％，0.5％劑量組的累積死亡率40％則顯著低于對照組（P<0.05）。表明蜂膠配淫羊藿可開發(fā)為一種新型的免疫增強劑，飼料中

8、適宜添加劑量為0.5％。
　　 （3）黃芪配甘草對胭脂魚幼魚非特異性免疫機能和抗病力的影響：醇提法制備黃芪提取物（黃芪多糖含量約為38.4％）和甘草提取物（甘草酸含量約為31.2％，總黃酮約為20.5％），二者按生藥重量比10：6合用，按質量分數(shù)0％（對照組）、0.1％、0.5％和1.0％添加于成鰻粉中，飼喂胭脂魚幼魚，分別于第10 d、20 d、30 d、40 d、50 d各取樣一次，分離頭腎巨噬細胞，檢測吞噬活性和呼吸爆發(fā)活

9、力等細胞免疫指標；分離血清，檢測溶菌酶活性、殺菌活性和替代補體溶血活性等體液免疫指標。結果顯示，1.0％劑量組在第30 d和第40 d、0.5％劑量組在第40 d以及0.1％劑量組在第50 d的頭腎巨噬細胞吞噬活性均顯著高于對照組（P<0.05）；0.5％劑量組在第20 d和第40 d、1.0％劑量組在第40 d和第50 d的頭腎巨噬細胞呼吸爆發(fā)活力與對照組比較均有顯著性升高（P<0.05）；1.0％劑量組在第20 d和第50 d、0.

10、5％劑量組在第30 d以及0.1％劑量組在第40 d的血清溶菌酶活性均有明顯增加，與對照組比較差異顯著（P<0.05）；1.0％劑量組在第30 d和第40 d、0.5％劑量組在第40 d和第50 d的殺菌百分率均有明顯升高，與對照組比較有顯著性差異（P<0.05）；1.0％劑量組在第40和50 d、0.5％劑量組在第30 d以及0.1％劑量組在第50 d的．ACH50與對照組比較均有明顯升高（P<0.05）。飼喂50 d后，各組隨機取2

11、0尾魚，用A．hydrophila腹腔注射進行攻毒試驗，探討黃芪配甘草對胭脂魚幼魚抗病力的影響，結果顯示1周內0.5％和0.1％劑量組的累積死亡率分別為45％和60％，1.0％劑量組的累積死亡率35％則顯著低于對照組（P<0.05）。結果表明，黃芪配甘草可開發(fā)為一種新型的免疫增強劑，對胭脂魚幼魚免疫功能的提高表現(xiàn)出劑量一效應關系，適宜添加劑量為1.0％。
　　 （4）陳皮對胭脂魚幼魚非特異性免疫機能和抗病力的影響：醇提法制備陳皮

12、提取物（總黃酮含量約為3.3％，橙皮苷含量約為1.6％），按質量分數(shù)0％（對照組）、0.1％、0.5％和1.0％添加于成鰻粉中，飼喂胭脂魚幼魚，分別于第10 d、20 d、30 d、40 d、50 d各取樣一次，分離頭腎巨噬細胞，檢測吞噬活性和呼吸爆發(fā)活力；分離血清，檢測溶菌酶活性、殺菌活性和替代補體溶血活性。結果顯示，第50 d時，陳皮提取物1.0％劑量組的頭腎巨噬細胞吞噬活性顯著高于對照組（P<0.05）；0.5％劑量組在第30 d

13、、1.0％劑量組在第40 d的頭腎巨噬細胞呼吸爆發(fā)活力與對照組比較均有顯著性升高（P<0.05）；第20 d，1.0％劑量組的血清溶菌酶活性比對照組有明顯增加（P<0.05）；陳皮提取物對血清殺菌活性和ACH50則無明顯影響。飼喂50 d后，各組隨機取20尾魚，用A．hydrophila腹腔注射進行攻毒試驗，探討陳皮對胭脂魚幼魚抗病力的影響，結果顯示1周內1.0％、0.5％、0.1％劑量組的累積死亡率分別為50％、55％、65％，與對照

14、組比較差異并不顯著（P>0.05）。結果表明陳皮提取物能夠在一定程度上增強胭脂魚幼魚的非特異性免疫力，關于陳皮中單一成分橙皮苷對胭脂魚幼魚非特異性免疫力和抗病力的影響尚需進一步研究。
　　 （5）中藥提取物的體外免疫試驗：以胭脂魚幼魚的頭腎巨噬細胞為研究對象，探討兩種中藥提取物組方（蜂膠配淫羊藿、黃芪配甘草）對離體培養(yǎng)細胞免疫活性的影響。不連續(xù)密度梯度分離法制備頭腎巨噬細胞，純化，接種到96孔培養(yǎng)板，加入終濃度依次為0、25、5