葉綠體微衛(wèi)星分析麻瘋樹的遺傳多樣性.pdf

1、麻瘋樹(Jatropha curcas Linn)是大戟科(Euphorbiaceae)灌木樹種，是一種多用途且有較高潛在價(jià)值的生物柴油樹種。具有生長(zhǎng)期短、耐旱、造林成本低及含油量高的特點(diǎn)。由于世界范圍的能源緊張和生物質(zhì)能的可再生性，麻瘋樹引起廣泛關(guān)注。
　　 本研究采用cpSSR標(biāo)記技術(shù)對(duì)來自云南和四川的10個(gè)麻瘋樹野生居群200個(gè)樣本的遺傳多樣性進(jìn)行分析，比較麻瘋樹居群間的遺傳差異，以期為麻瘋樹的良種選育以及種質(zhì)資源保護(hù)提供

2、依據(jù)。研究結(jié)果如下：
　　 1.采用改良的CTAB法從麻瘋樹嫩葉中提取DNA。用該法提取的麻瘋樹DNA質(zhì)量完全能滿足cpSSR分析的要求。
　　 2.通過對(duì)影響cpSSR-PCR擴(kuò)增的模板DNA、dNTP、引物、TaqDNA聚合酶以及Mg2+濃度等5因素（不同水平）的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，建立了適合于麻瘋樹cpSSR-PCR擴(kuò)增的體系：2.00mmol/LMg2+、2U/μLTaqDNA聚合酶、0.2mmol/LdNTP、0.2μm

3、ol/L引物、35ng/μLDNA模板、用超純水補(bǔ)足20μL；與之相適應(yīng)的擴(kuò)增程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性5min；94℃變性30s，52℃退火30s，72℃延伸1min，循環(huán)36次；最后在72℃延伸5min；4℃保存。
　　 3.從25對(duì)cpSSR通用引物中篩選出12對(duì)引物，用于200個(gè)麻瘋樹樣本的cpSSR分析。12對(duì)引物共檢測(cè)到25個(gè)位點(diǎn)，其中22個(gè)位點(diǎn)是多態(tài)性位點(diǎn)，多態(tài)性位點(diǎn)百分率(P)為76.28％，說明這些居群適應(yīng)環(huán)境的能力

4、較強(qiáng)。研究結(jié)果表明，所檢測(cè)的10個(gè)麻瘋樹野生居群具有較高的遺傳多樣性。其中，四川會(huì)理(SCHL)的遺傳多樣性最高，為0.6269；云南瀘水(YNLS)遺傳多樣性最低，為0.4095。
　　 4.cpSSR基因座揭示了麻瘋樹的遺傳變異：觀測(cè)等位基因數(shù)A=1.9840，有效等位基因數(shù)Ae=1.7136；Nei基因多樣性指數(shù)H=0.4020以及Shannon指數(shù)I=0.5767。另外，居群內(nèi)的基因多樣性為Hs=0.4051，居群間的基

5、因多樣DsT=0.0357。AMOVA分析得到居群內(nèi)的遺傳多樣性為91.02％，居群間的遺傳多樣性為8.98％。這都說明遺傳變異主要來自于居群內(nèi)個(gè)體間。另外，居群間基因流Nm＞1，為3.0585，說明居群間存在一定的基因流。
　　 5.基于cpSSR擴(kuò)增條帶數(shù)據(jù)建立了UPGMA聚類圖。10個(gè)麻瘋樹野生居群的遺傳一致度范圍是0.8127-0.9798；遺傳距離范圍是0.0204-0.2073。其中四川雷波(SCLB)和云南西雙版納

6、(XSBN)的遺傳一致度最近(I=0.9798)，遺傳距離最小(D=0.0204)；而云南瀘水(YNLS)和四川金河(SCJH)的遺傳一致度最遠(yuǎn)(I=0.8127)，遺傳距離最大(D=0.1614)。另外，在UPGMA聚類圖中四川金河(SCJH)和四川花棚子(SCHPZ)聚為一類；而四川會(huì)理(SCHL)、四川會(huì)東(SCHD)和四川雷波(SCLB)與云南的5個(gè)居群(YNSB、YNLX、YNPR、XSBN、YNLS)聚為另一類，這可能與四川