美麗硬仆骨舌魚三個種群遺傳結(jié)構(gòu)的分析.pdf

1、本研究用RAPD技術(shù)、線粒體DNA上的細胞色素b基因及D-Loop序列分析方法，結(jié)合形態(tài)學(xué)性狀分析研究了美麗硬仆骨舌魚(Scleropages formosus)的3個主要自然種群：紅龍魚、金龍魚和青龍魚之間的遺傳差異，結(jié)果如下： 1．所檢測的形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)表明三個種群在形態(tài)上極為相似，其最明顯的差異是體色，分別為金紅色、金黃色和青灰色；此外金龍魚的軀體比紅龍魚和青龍魚的略顯肥厚，其體高和體厚的比值為1.75，而紅龍魚和青龍魚的比值分別為

2、1.95和l.94。 2．篩選出13條引物，對美麗硬仆骨舌魚12個樣本(5尾紅龍、4尾金龍和3尾青龍)進行RAPD擴增。結(jié)果從12尾龍魚中共檢測到126個位點，其中多態(tài)性位點73個，多態(tài)位點的比例為57.9％。美麗硬仆骨舌魚個體間的遺傳距離值介于O.04～O.3之間，3個群體內(nèi)的遺傳距離分別是：紅龍魚0.124，青龍魚0.119，金龍魚0.175。而群體間的遺傳距離分別是：紅龍魚與青龍魚之間為0.16，紅龍魚與金龍魚之間為0.231，金

3、龍魚與青龍魚之間為0.19。在遺傳關(guān)系圖譜上，紅龍魚和青龍魚聚為一支，金龍魚單獨聚成一支。 3．進行線粒體DNA Cytb基因序列的克隆及分析，金龍魚(Jl)、紅龍魚(H2)和青龍魚(q3)的Cytb基因的全長為1141bp，共有5個變異位點，即5個轉(zhuǎn)換位點，它們都在密碼子的第三位，所編碼的氨基酸只有1個變異。用Vector NTI suite8軟件分析個體間的遺傳距離，青龍與紅龍之間的遺傳距離為O.003，青龍與金龍的為0.004，

4、紅龍與金龍的為O.003。 4．進行線粒體DNA D-Loop序列的克隆，擴增獲得三尾(金龍魚1、紅龍魚1、紅龍魚2)美麗硬仆骨舌魚的D-Loop全序列，并對其序列特征進行分析。美麗硬仆骨舌魚D-Loop的結(jié)構(gòu)與大部分魚類的相似，靠近D-Loop的5’端有3個終止相關(guān)序列TAS(I、Ⅱ、Ⅲ)，靠近D-Loop的3’端有4個保守區(qū)域CSBI、CSB2、CSB3、CSB—D，在終止相關(guān)序列和保守區(qū)域之間是連續(xù)重復(fù)區(qū)域。由于每個個體的連續(xù)重復(fù)

5、區(qū)域個數(shù)的不等，導(dǎo)致線粒體DNA長度的異質(zhì)性。根據(jù)D-Loop全序列的測序結(jié)果設(shè)計引物擴增另外三尾(金龍魚2、青龍魚1和青龍魚2)靠近5’端的連續(xù)重復(fù)區(qū)域區(qū)及其旁側(cè)共714bp長的序列，測序并進行遺傳關(guān)系分析。在6尾美麗硬仆骨舌魚的此714bp長的D-Loop片段序列中檢測出29個轉(zhuǎn)換位點。用MEGA3.O分析此片斷得出，青龍魚與金龍魚之間的遺傳距離為O.011～O.029，青龍魚與紅龍魚之間的遺傳距離為O.013～0.03，紅龍魚與金

6、龍魚之間的遺傳距離為0.016～0.037。以澳洲星點龍魚作為外群構(gòu)建遺傳關(guān)系樹。在此關(guān)系圖中，金龍魚和紅龍魚混雜且聚成一支，青龍魚單獨成一支，澳洲星點龍魚與美麗硬仆骨舌魚從進化樹的根部就已經(jīng)被分開。 用RAPD對基因組DNA的研究結(jié)果表明，紅龍魚和青龍魚之間的遺傳關(guān)系較近，金龍魚與它們的較遠而在系統(tǒng)進化樹上單獨分為一支。此分析的結(jié)果與Gen的研究結(jié)果相同，且形態(tài)學(xué)的結(jié)果也偏向于支持金龍魚的特異性。但mtDNA上Cytb和D-Loo