厚樸良種選擇及其RAPD種源鑒別研究.pdf

1、厚樸主要來源厚樸Magnolia officinalis及其變種凹葉厚樸Mofficinalis var biloba。歷史上按產(chǎn)地分為川樸(產(chǎn)于湖北和四川，來源于厚樸)和溫樸(產(chǎn)于浙江和福建，來源于凹葉厚樸)。真實(shí)性是品種質(zhì)量評(píng)價(jià)的重要標(biāo)準(zhǔn)之一，其鑒定技術(shù)也是解決新品種權(quán)益保護(hù)、種子(苗)經(jīng)濟(jì)糾紛問題的技術(shù)基礎(chǔ)。選擇優(yōu)良品種，建立厚樸優(yōu)良性狀綜合評(píng)價(jià)體系，收集保存優(yōu)良種質(zhì)資源，完善豐產(chǎn)栽培技術(shù)是當(dāng)前大力發(fā)展中藥材厚樸前提工作。

2、　　 本文對(duì)福建省不同種源地厚樸調(diào)查及形態(tài)指標(biāo)研究的基礎(chǔ)上，篩選出綜合評(píng)價(jià)高的優(yōu)良種源區(qū)及有效成分含量高、性狀優(yōu)良的優(yōu)樹，并對(duì)全國(guó)不同種源區(qū)厚樸進(jìn)行RAPD分子標(biāo)記及遺傳多樣性等進(jìn)行分析研究。主要研究結(jié)果如下：
　　 1、厚樸酚類提取按正交設(shè)計(jì)L9(34)進(jìn)行試驗(yàn)研究，表明乙醇濃度是厚樸酚類提取測(cè)定的關(guān)鍵因素，其次是超聲處理時(shí)間。其提取最優(yōu)方法為：乙醇濃度為90％，浸泡時(shí)間為50min，浸泡溫度為60℃，超聲時(shí)間為20min。

3、
　　 2、調(diào)查顯示厚樸在福建省基本上呈零星分布狀態(tài)，主要分布于福建省西部和北部。對(duì)24個(gè)縣市的147株初選厚樸優(yōu)樹進(jìn)行聚類分析，不同地理種源的厚樸酚含量差異較大，147株厚樸初選優(yōu)樹中酚含量最低為0.0907mg.g-1，最高5.4759mg.g-1。以采樣地的基本氣候因子對(duì)厚樸酚類含量影響分析表明，年均溫和無霜期對(duì)厚樸酚類物質(zhì)含量影響最大。
　　 3、季節(jié)的變化對(duì)植物生長(zhǎng)次生代謝物質(zhì)的含量具有影響，枝皮中厚樸酚與和厚

4、樸酚含量在1月份達(dá)到最高，后降低再升高，到9月份又下降的趨勢(shì)。在厚樸葉中和厚樸酚含量始終高于厚樸酚含量，且嫩葉期趨勢(shì)更明顯；總的酚含量由嫩葉到老葉呈增加趨勢(shì)，直到落葉前含量達(dá)到最高。
　　 4、不同器官部位厚樸酚類物質(zhì)含量存在一定的差異，但同一器官中厚樸酚含量與和厚樸酚含量相差不大。不同器官中酚類物質(zhì)含量大小順序依次是：根皮＞干皮＞枝皮＞嫩芽＞種子＞果實(shí)＞枝芯＞葉。
　　 5、厚樸隨著樹齡的增長(zhǎng)、厚樸枝皮和干皮中厚樸酚與

5、和厚樸酚含量表現(xiàn)為升高-下降-升高的趨勢(shì)。厚樸在中幼林時(shí)隨著樹齡增大，酚含量增多，大致在25年左右達(dá)到最大，以后呈下降趨勢(shì)，百年老樹有效成含量又有增高的現(xiàn)象。厚樸葉中酚類含量隨樹齡增大呈下降趨勢(shì)，幼齡樹葉中酚類含量較高。
　　 6、同一群體內(nèi)，胸徑大小相近的厚樸植株酚類含量個(gè)體間存在著較大的變異，個(gè)體間各部位酚類含量差異顯著。厚樸優(yōu)良種源選擇時(shí)，樹高、冠幅、樹皮厚、枝條數(shù)之間都呈極顯著或顯著的正相關(guān)；通直度、圓滿度、健康度相關(guān)性

6、不大；枝皮中酚含量與各樹體性狀之間都呈極顯著或顯著的正相關(guān)。
　　 7、按特征根大于或等于1原則提取四個(gè)主成分，對(duì)24個(gè)種源各主成分與綜合評(píng)分，24個(gè)種源中綜合排名較前的為柘榮、尤溪、連城、福州。其次是武平、永泰、壽寧、清流、沙縣、永安、浦城、農(nóng)大、屏南、明溪、寧化、漳平，最少是泰寧、南平、順昌、建陽、大田、建甌、福安、光澤。
　　 8、在優(yōu)樹選擇時(shí)各性狀間相關(guān)性分析，胸徑與冠幅、樹高、酚含量及樹高與冠幅、枝下高、枝條數(shù)

7、，冠幅與枝下高之間有極顯著正相關(guān)，通直度與樹皮厚顯著的關(guān)系，其它指標(biāo)相關(guān)性不大。
　　 9、按主成分分析法中累計(jì)貢獻(xiàn)率大于或等于85％原則提取了六個(gè)主成分，對(duì)54株優(yōu)樹各主成分與綜合評(píng)分，優(yōu)樹中得分較高為11號(hào)、6號(hào)、131號(hào)、146號(hào)、16號(hào)家系，其次為123號(hào)、33號(hào)、49號(hào)、114號(hào)、2號(hào)家系綜合排名較前。聚類分析結(jié)果分為2類種源，第一類是2、14、99、107、113、8、141、114、37、75、44、117、135

8、、109、16、33、49、123、6、11、131、146，第二類13、102、111、43、116、145、50、70、93、136、76、90、132、147、38、115、119、45、101、20、110、142、125、21、46、120、138、129、97、94、29、112。
　　 10、根據(jù)6個(gè)引物對(duì)厚樸資源擴(kuò)增出的96條可重現(xiàn)RAPD譜帶獲得的數(shù)據(jù)矩陣，構(gòu)建了89份厚樸資源的DNA指紋圖譜。結(jié)果表明，S60

9、與S69、S60與S91、S60與S1412、S60與S330、S60與S1422、S69與S91、S69與S1412、S69與S1422、S91與S1412、S1412與S1422、S1412與S330這11個(gè)組合中的每個(gè)組合形成的擴(kuò)增數(shù)據(jù)矩陣都可以成為一張指紋圖譜，比較容易地把89份資源相互區(qū)分鑒別開來。
　　 11、全國(guó)89個(gè)樣本的來源分析，第一類為福建建甌，遺傳結(jié)構(gòu)具有特殊性。第二類包括四川江郵、湖南道縣，福建明溪種源和