生物農(nóng)藥AR156制劑發(fā)酵工藝、田間應(yīng)用及其防病機理初探.pdf

1、植物根圍促生菌(PlantGrowth-PromotingRhizobacteria,PGPR)廣泛存在于植物根圍土壤中，通過營養(yǎng)、定殖位點的競爭，產(chǎn)生拮抗性物質(zhì)等方式抑制病原菌侵染及擴展，并且促進植物的生長。具有潛力的PGPR菌株的規(guī)?；a(chǎn)及田間應(yīng)用也是生防菌株產(chǎn)業(yè)化的重要環(huán)節(jié)。因此怎樣有效開發(fā)利用潛力生防菌株，形成產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)、推廣應(yīng)用、機理研究多管齊下的有效模式，是目前國內(nèi)外生防研究方面的熱點和焦點問題。本研究通過對蠟質(zhì)芽孢桿菌(

2、Bacilluscereus)AR156發(fā)酵工藝優(yōu)化、田間應(yīng)用、以及生防機理等方面的初步研究，希望能為建立有效的生防菌應(yīng)用研究模式提供一些參考。
　　1.生防菌AR156發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件的優(yōu)化
　　對前期篩選得到的在田間試驗中防治根結(jié)線蟲效果較好的蠟質(zhì)芽孢桿菌(Bacilluscereus)AR156，通過單因素篩選及正交試驗的方法進行了發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化，得到的最佳配比為:麥芽糖0.25％，玉米粉0.5％，黃豆粉0.5％，

3、胰蛋白胨0.5％，CaCl2·2H2O0.05％，MnSO4·H2O0.05％，K2HPO40.1％。同時對實驗室搖瓶條件下液體發(fā)酵的主要影響因子溫度、轉(zhuǎn)速、初始pH值等進行實驗探討，確定了最佳培養(yǎng)條件:初始pH值7.0，裝液量200mL/L，接種量5％，發(fā)酵溫度28℃，轉(zhuǎn)速200r/min，發(fā)酵時間48h。優(yōu)化后芽孢產(chǎn)量為1.03×109CFU/mL，芽孢生成率在97％以上，明顯高于初始發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵結(jié)果。
　　2.AR156單

4、劑及AR156合劑對黃瓜根結(jié)線蟲防治田間試驗
　　AR156單劑及其合劑在已經(jīng)完成的室內(nèi)離體試驗和溫室實驗中，表現(xiàn)出對根結(jié)線蟲良好的防治作用。08年-09年在江蘇省淮安市丁集鎮(zhèn)溫室大棚進行田間防效試驗，結(jié)果表明使用AR156單劑及合劑均能有效防治黃瓜根結(jié)線蟲，同時對黃瓜有一定的促生和增產(chǎn)效應(yīng)。AR156單劑對黃瓜根結(jié)線蟲的防效達到53.70％，增產(chǎn)率達到31.49％,AR156合劑的防效達到83.33％，增產(chǎn)效果達到49.10％，

5、顯著高于化學(xué)藥劑3％呋喃丹顆粒劑。
　　3.AR156合劑在番茄根圍定殖能力測定
　　對實驗室前期篩選到的三種較好的生防菌芽孢桿菌（Bacillasspp.）AR156，SM21及沙雷氏菌（Serratiasp.）XY21，分別使用抗生素卡那霉素（Kanamycin），鏈霉素（Streptomycin）及利福平（Rifampin）篩選得到抗性為200μg/mL的突變體菌株，通過一系類驗證試驗確定后選擇抗生素突變體AR-km2

6、，SM-Strl，XY-rif(1)作為供試菌株，進行單劑，兩兩合劑，三菌合劑的番茄根圍定殖實驗。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)三種生防菌無論是以單劑還是合劑處理后均可在番茄根圍較好定殖，兩株芽孢桿菌AR156及SM21在根圍的定殖出現(xiàn)了先降后升并趨于穩(wěn)定的趨勢，60d后定殖量在105CFU/g根圍土，沙雷氏菌XY21在根圍的定殖情況為緩慢下降并趨于穩(wěn)定，至60d后在根圍的定殖量在104-105CFU/g根圍土。
　　4.結(jié)論
　　本文對以蠟