UVB對(duì)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的輻射損傷及茶多酚的保護(hù)作用.pdf

1、年齡相關(guān)的黃斑性病變(Age-related macular degeneration,ARMD)是一種世界范圍內(nèi)的眼科疾病。紫外輻射是產(chǎn)生過(guò)氧化脅迫的來(lái)源之一,能夠引起RPE細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)和形態(tài)的變化。太陽(yáng)光譜中的UVB輻射會(huì)導(dǎo)致視網(wǎng)膜表皮損傷,進(jìn)而引起包括ARMD在內(nèi)的多種人體視網(wǎng)膜疾病。本實(shí)驗(yàn)研究了紫外對(duì)RPE細(xì)胞的損傷情況及茶多酚對(duì)RPE細(xì)胞的保護(hù)和治愈效果。盡管對(duì)紫外引起的RPE細(xì)胞死亡的分子生物學(xué)機(jī)理仍在探索中,但是細(xì)胞內(nèi)的氧

2、化脅迫是細(xì)胞死亡的主要原因。本研究主要利用人類(lèi)RPE培養(yǎng)體系研究了茶多酚溶液協(xié)助其抵御和修復(fù)UVB輻射的影響。
　　 MTT實(shí)驗(yàn)、光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果證明,經(jīng)過(guò)100μW/cm2光強(qiáng)2小時(shí)的UVB輻射處理對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生一定損傷,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯致?lián)p變化,由正常的梭形均勻分布到變圓簇聚成團(tuán)。茶多酚溶液能夠減少UVB輻射產(chǎn)生的傷害。低濃度下,茶多酚溶液濃度與細(xì)胞存活率呈正相關(guān),而高濃度的茶多酚溶液具有細(xì)胞毒性。
　　 利用電子顯微

3、鏡觀察RPE細(xì)胞超微結(jié)構(gòu),經(jīng)過(guò)2小時(shí)紫外輻射后,RPE細(xì)胞微絨毛脫落,核仁消失,線(xiàn)粒體變形,空泡結(jié)構(gòu)增多;而正常RPE細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)分布均勻,完整的細(xì)胞核及核仁完整,微絨毛豐富,線(xiàn)粒體脊?fàn)罱Y(jié)構(gòu)清晰可見(jiàn),狀態(tài)良好。經(jīng)過(guò)70mg/L和140mg/L的茶多酚預(yù)處理的樣品中,細(xì)胞整體形態(tài)接近正常細(xì)胞,在140mg/L的茶多酚預(yù)處理的樣品中,大部分線(xiàn)粒體形態(tài)正常,而70mg/L的茶多酚預(yù)處理的樣品中部分線(xiàn)粒體呈現(xiàn)非正常的啞鈴狀;茶多酚后處理的樣品與預(yù)

4、處理組相近,但效果稍差,70mg/L和140mg/L的茶多酚后處理的樣品中線(xiàn)粒體均呈現(xiàn)啞鈴狀。電鏡觀察結(jié)果顯示茶多酚預(yù)處理和后處理均能削弱UVB誘導(dǎo)的RPE細(xì)胞損傷。
　　 DNA凝膠電泳結(jié)果顯示,正常細(xì)胞僅有一條清晰條帶,而在進(jìn)行紫外輻射處理后,細(xì)胞因?yàn)檩椛鋼p傷死亡而產(chǎn)生大量的斷片化條帶。在預(yù)處理組中,140mg/L and70mg/L處理后,RPE細(xì)胞DNA條帶基本清晰;后處理組中效果略差,尤其是70mg/L處理效果不理想。

5、推測(cè)認(rèn)為茶多酚溶液能夠抑制UVB引起的DNA損傷,促進(jìn)DNA損傷的修復(fù)。
　　 茶多酚可以調(diào)節(jié)RPE細(xì)胞中c-fos、survivin兩種基因的表達(dá)。在茶多酚預(yù)處理組和后處理組中,survivin基因的表達(dá)被抑制。Survivin基因是凋亡抑制家族中的一員,survivin蛋白通過(guò)抑制caspase激活通道,從而減少對(duì)細(xì)胞程序性死亡。Survivin表達(dá)的紊亂導(dǎo)致細(xì)胞凋亡增加。這一結(jié)果表明茶多酚拮抗UVB引起的RPE細(xì)胞損傷可能