芳氧苯氧丙酸酯類除草劑多殘留酶聯(lián)免疫分析方法研究.pdf

1、為研究農(nóng)藥多殘留酶聯(lián)免疫分析方法，本研究以精惡唑禾草靈和氰氟草酯為研究對象，合成了精惡唑禾草靈半抗原(fenoxaprop-p)和氰氟草酯半抗原(cyhalofop-p)。采用碳二亞胺法將精惡唑禾草靈半抗原和氰氟草酯半抗原依次與載體蛋白BSA偶聯(lián)，制備得到多決定簇人工免疫原，紫外光譜分析證明偶聯(lián)成功。精惡唑禾草靈半抗原、氰氟草酯半抗原與BSA偶聯(lián)比分別為9.2∶7.8∶1，通過混合酸酐法將兩半抗原和OVA偶聯(lián)作為包被抗原。以多決定簇免疫

2、原免疫雄性新西蘭大白兔，獲得高親和性的寬譜特異性抗體，對精惡唑禾草靈和氰氟草酯的親和常數(shù)分別為5×109和7.5×109，間接競爭酶聯(lián)免疫吸附測定法(ic-ELISA)測定凍干粉對精惡唑禾草靈和氰氟草酯的效價分別為5.12×105和1.02×106。
　　 通過方陣滴定法篩選包被抗原和抗體的最適工作濃度，進(jìn)一步研究了有機(jī)溶劑、pH值和離子強(qiáng)度在間接競爭ELISA中對精惡唑禾草靈和氰氟草酯與抗體親和作用的影響，確定了精惡唑禾草靈和

3、氰氟草酯ic-ELISA法的最佳條件。確定了30％的甲醇和pH7.5、0.5 mol/L鈉離子強(qiáng)度的磷酸鹽緩沖液為精惡唑禾草靈和氰氟草酯間接競爭酶聯(lián)免疫吸附分析方法的最佳工作條件。
　　 在優(yōu)化條件下，利用制備的寬譜特異性抗體建立了精惡唑禾草靈和氰氟草酯ic-ELISA方法。精惡唑禾草靈ic-ELISA抑制反應(yīng)曲線在0.005～5 mg/L標(biāo)樣濃度范圍與抑制率有較好線性關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y=-24.799 x+31.81

4、6，R2=0.9975，IC50為0.185 mg/L，LOD(IC10)為0.004 mg/L。氰氟草酯ic-ELISA抑制反應(yīng)曲線在0.005～1 mg/L標(biāo)樣濃度范圍與抑制率有較好線性關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y=-30.776 x+8.422,R2=0.9956,IC50為0.045 mg/L,LOD(IC10)為0.002 mg/L。制備的抗體對氰氟草酯的交叉反應(yīng)率是411.1％，對惡唑酰草胺的交叉反應(yīng)率是55.56％，該抗體

5、與其它結(jié)構(gòu)類似的芳氧苯氧丙酸酯類除草劑沒有明顯的交叉反應(yīng)。
　　 以建立的ic-ELISA分析方法，進(jìn)行了水、土壤、稻米和大豆中的添加回收率試驗，添加濃度為0.05mg/L(mg/kg)～1mg/L(mg/kg)，精惡唑禾草靈的添加回收率為86.86％114.52％，變異系數(shù)為0.72％～9.32％;氰氟草酯的添加回收率為82.07％119.11％，變異系數(shù)為1.23％～7.75％;惡唑酰草胺的添加濃度是0.1 mg/L(mg/

6、kg)～1 mg/L(mg/kg)，添加回收率為82.51-114.46％，變異系數(shù)為1.03％～8.18％，本研究建立的ELISA方法均符合農(nóng)殘分析的要求。
　　 分別用寬譜特異性抗體、混合抗體檢測氰氟草酯和精惡唑禾草靈混合物的殘留量，兩種檢測方法的IC50分為0.501 mg/L和0.344 mg/L。寬譜特異性抗體測定兩種農(nóng)藥的最低檢測限為0.017 mg/L，在自來水、河水、土壤、稻米樣品中的添加回收率為77.6～118