磷脂酶C和D在木聚糖酶誘導(dǎo)的水稻懸浮細(xì)胞抗病反應(yīng)中的作用.pdf

1、本文以水稻懸浮培養(yǎng)細(xì)胞為材料，研究磷脂酶C和磷脂酶D在木聚糖酶（Xylanase）誘導(dǎo)的水稻細(xì)胞抗病反應(yīng)中的作用。
　　 我們用Xylanase（100μg/ml）處理繼代3-5天的水稻懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞濃度（0.05g/ml），發(fā)現(xiàn)PLDα和PLDβ的活性在處理初期都被迅速激活，并在1h內(nèi)達(dá)到峰值。但是PLDα的活性在2h時又再次被激活，出現(xiàn)第二個峰值，而后活性下降，趨于對照值；而PLDβ的活性在1h出現(xiàn)峰值后就不斷下降，甚至

2、低于對照值。在RT-PCR實驗中，我們發(fā)現(xiàn)，OsPLDα1的表達(dá)并沒有因為Xylanase的處理而發(fā)生改變，與對照組表達(dá)水平基本一致，但是OsPLDβ1的表達(dá)量的變化和它的活性變化趨勢基本一致，在處理初期迅速表達(dá)，而后逐漸下降。而OsPI-PLC1的表達(dá)卻是逐漸升高的趨勢，在處理12h時明顯高于對照。
　　 我們檢測了Xylanase處理條件下細(xì)胞中活性氧的情況，發(fā)現(xiàn)H2O2和O2的含量都發(fā)生了變化，H2O2出現(xiàn)了明顯的雙峰值，

3、而O2的積累量一直升高，但也能看出其產(chǎn)生速率有兩個峰值，基本都在1h和4h時。然后我們用不同濃度的PA處理細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)隨著濃度的升高，ROS的含量也在不斷的升高。這說明Xylanase誘導(dǎo)的活性氧爆發(fā)與PLD和PLC的活性有關(guān)。隨后我們又反證，在處理前分別加入PLD的抑制劑1-Butanol和PLC的抑制劑Neomycin Sulfate，發(fā)現(xiàn)ROS爆發(fā)被抑制了。
　　 利用RT-PCR技術(shù)檢測抗病基因PR10α和OsChit-1

4、的表達(dá)與PLD和PLC之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)XylanaSe能夠誘導(dǎo)PRIOα和OsChit-1的表達(dá)，但是只有PR10α的表達(dá)與PLC和PLD有關(guān)，PLC和PLD的活性被抑制后，PR10α的表達(dá)也降低，而OsChit-1的表達(dá)卻與PLC和PLD都沒有關(guān)系。
　　 在過敏性細(xì)胞死亡和細(xì)胞凋亡的實驗中我們都發(fā)現(xiàn)PLD和PLC能夠調(diào)控Xylanase誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡和凋亡，PLD和PLC的活性被抑制后，細(xì)胞死亡和細(xì)胞凋亡都被緩解了。在檢測植

5、保素-櫻花素時，發(fā)現(xiàn)1-Butanol能夠抑制Xylanase誘導(dǎo)的細(xì)胞中櫻花素的合成，而Neomycin Sulfate沒有抑制這種作用，說明PLD參與并調(diào)控了植保素的合成。
　　 綜上所述，Xylanase能夠誘導(dǎo)水稻細(xì)胞中PLDα和PLDβ的活性表達(dá)，但是對基因OsPLDαl的表達(dá)沒有影響，而對OsPLDβ1和OsPI-PLC1的表達(dá)有誘導(dǎo)作用；PLD和PLC通過PA參與調(diào)控Xylanase誘導(dǎo)的水稻細(xì)胞中活性氧爆發(fā)；PL