水稻轉(zhuǎn)錄因子OsBP-73靶基因的初步篩選與水稻基因OsRRM及其同源基因OsRRMT相互作用因子的篩選.pdf

1、本論文主要包括以下兩方面內(nèi)容： 1．水稻轉(zhuǎn)錄因子OsBP-73靶基因的初步篩選在基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中，轉(zhuǎn)錄因子(反式作用因子)與靶基因間的相互作用是構(gòu)成基因表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的基礎(chǔ)。它們的作用主要是使每一個(gè)基因在復(fù)雜的生命活動(dòng)過(guò)程中適時(shí)、適地、適量地表達(dá)。鑒定出轉(zhuǎn)錄因子的靶基因可以幫助人們了解復(fù)雜生命活動(dòng)的本質(zhì)。 本論文研究所在實(shí)驗(yàn)室以水稻蠟質(zhì)基因上游-840bp-810bp之間一段能增強(qiáng)基因表達(dá)，并能與水稻胚乳核蛋白結(jié)合的3

2、1bp順序?yàn)轸~餌，利用酵母單雜交系統(tǒng)從水稻cDNA表達(dá)文庫(kù)中篩選到3個(gè)編碼DNA結(jié)合蛋白的陽(yáng)性克隆，OsBP-73(Oryza sativa Binding Protein)是其中的一個(gè)陽(yáng)性克隆。OsBP-73基因不僅在水稻胚乳組織中表達(dá)，而且在根、莖和葉等組織中也都有表達(dá)；雙鏈RNA干擾實(shí)驗(yàn)又觀察到水稻轉(zhuǎn)基因植株在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期出現(xiàn)生長(zhǎng)抑制現(xiàn)象。這就暗示著轉(zhuǎn)錄因子OsBP-73不僅調(diào)控Wx基因表達(dá)，影響水稻胚乳組織中的直鏈淀粉含量，還可能

3、調(diào)控一些其它基因的表達(dá)，從而影響水稻的生長(zhǎng)發(fā)育。本文對(duì)轉(zhuǎn)錄因子OsBP-73在水稻整個(gè)基因組的靶基因進(jìn)行了初步篩選：首先在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)獲得水稻轉(zhuǎn)錄因子OsBP-73的蛋白p512(全長(zhǎng))和p73(非全長(zhǎng)，含有DNA結(jié)合功能域)，再用純化后的p73蛋白通過(guò)pull-down方法對(duì)其靶基因進(jìn)行了初步篩選，獲得22個(gè)陽(yáng)性克隆，為進(jìn)一步研究轉(zhuǎn)錄因子OsBP-73參與的水稻轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)提供依據(jù)。 2．水稻基因OsRRM及其同源基因O

4、sRRMT相互作用因子的篩選本論文研究所在實(shí)驗(yàn)室通過(guò)啟動(dòng)子捕獲方法分離到一個(gè)在水稻胚乳中特異表達(dá)的基因OsRRM。OaRRM具有兩個(gè)RRM(RNA recognition motif)結(jié)構(gòu)域、一個(gè)SPOC(Spen paralog and ortholog C-terminal)結(jié)構(gòu)域和一個(gè)類似L-Zip(Leucinezipper)的結(jié)構(gòu)域，是水稻中第一個(gè)被報(bào)道的Spen基因。Spen基因最早在動(dòng)物中被命名，在動(dòng)物中Spen基因家族的