地衣芽孢桿菌KL6對(duì)鯉魚生產(chǎn)性能及消化酶活性的影響.pdf

1、近年來(lái),隨著我國(guó)魚類養(yǎng)殖技術(shù)的迅猛發(fā)展,高密度集約化的人工養(yǎng)殖已經(jīng)成為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的主流。因此,人們對(duì)魚類優(yōu)質(zhì)飼料的需求日益增漲。但是,這種高密度養(yǎng)殖經(jīng)常導(dǎo)致魚類病害頻繁發(fā)生,由此引發(fā)的水產(chǎn)養(yǎng)殖中濫用抗生素及生長(zhǎng)添加劑等現(xiàn)象比較嚴(yán)重。養(yǎng)殖魚體內(nèi)的這些有害殘留物不但嚴(yán)重威脅著人類的食品安全,而且能夠引發(fā)水環(huán)境的進(jìn)一步惡化。因此,目前我國(guó)魚類養(yǎng)殖業(yè)亟待研發(fā)無(wú)毒、無(wú)殘留、高效促生長(zhǎng)的飼料添加劑。前人的相關(guān)研究資料表明,芽孢桿菌不僅能有效抑制常見(jiàn)

2、病原菌,還能提高動(dòng)物消化酶活性并促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng),是一類良好的動(dòng)物益生菌菌株。本研究依據(jù)益生菌篩選的常規(guī)方法和芽孢桿菌的判定標(biāo)準(zhǔn),從熱泉中分離得到地衣芽孢桿菌(Bacillus Licheniformis)KL6株,并對(duì)其進(jìn)行了體外益生性評(píng)價(jià)、發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件優(yōu)化,并進(jìn)一步測(cè)定了不同濃度該菌劑對(duì)鯉魚(Cyprinus carpio)生產(chǎn)性能及消化酶活性的實(shí)際影響。研究者首先分離純化得到20株芽孢桿菌,選擇其中淀粉酶與蛋白酶活性最高的菌株

3、,經(jīng)菌落與菌體形態(tài)觀察、生理生化鑒定和16SrDNA序列分析后,將其定名為地衣芽孢桿菌KL6。本研究進(jìn)一步對(duì)地衣芽孢桿菌KL6進(jìn)行了抗逆性與益生性的體外評(píng)價(jià)試驗(yàn)。通過(guò)抑菌性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),該菌株對(duì)金黃色葡萄球菌有抑制作用,但對(duì)大腸桿菌與沙門氏桿菌的抑制作用不明顯。在高溫耐受性試驗(yàn)中,KL6經(jīng)85℃處理15min內(nèi)存活率無(wú)顯著變化(P>0.05),在處理20min時(shí)才比處理15min時(shí)存活率下降26.19％(P<0.05),該結(jié)果說(shuō)

4、明KL6菌株高溫耐受性較強(qiáng)。KL6菌株經(jīng)過(guò)模擬動(dòng)物胃液與腸液試驗(yàn),其活菌數(shù)受到模擬胃液pH的影響,隨著pH值的降低而顯著下降(P<0.05),經(jīng)pH=4、pH=3、pH=2的模擬胃液處理后存活率分別為50.00%、13.20%、7.33%;經(jīng)模擬腸液處理4h后存活率為84.40%。該試驗(yàn)表明地衣芽孢桿菌KL6具有作為微生物飼料添加劑的潛力。本研究還運(yùn)用4因素3水平正交試驗(yàn)和單因素試驗(yàn)對(duì)地衣芽孢桿菌KL6培養(yǎng)基及發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化。

5、結(jié)果發(fā)現(xiàn),4種因素對(duì)KL6活菌數(shù)影響的顯著性次序?yàn)?MnSO4>NaCl>酵母粉>蛋白胨;對(duì)KL6芽孢數(shù)影響的顯著性次序?yàn)?MnSO4>蛋白胨>NaCl>酵母粉。由此認(rèn)為該菌株培養(yǎng)基的最佳配比為蛋白胨1%、酵母粉0.5%.NaCl1%.25%濃度的硫酸錳0.2%。KL6菌株生長(zhǎng)適宜溫度為37℃。通過(guò)發(fā)酵罐放大培養(yǎng)結(jié)果確定,該菌株最佳的培養(yǎng)時(shí)間為14-16h,獲得的菌體數(shù)量約101.63×109cfu/

6、mL,芽孢率達(dá)到97.11%。以上數(shù)據(jù)表明地衣芽孢桿菌KL6能夠適于高密度液體發(fā)酵,本試驗(yàn)為以KL6為基礎(chǔ)的微生物飼料添加劑的開(kāi)發(fā)和大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)提供了理論依據(jù)。另外,本研究還對(duì)地衣芽孢桿菌KL6進(jìn)行了鯉魚投喂試驗(yàn),即在基礎(chǔ)日糧中添加不同濃度的KL6菌劑飼喂鯉魚,隨后測(cè)定不同濃度該菌劑對(duì)鯉魚生產(chǎn)性能及消化酶活性的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明,當(dāng)菌劑添加量為0.5%與1.0%時(shí),鯉魚的增重率、餌料系數(shù)與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05),鯉魚

7、的平均增重率分別提高了14.35%和15.24%,而餌料系數(shù)則分別下降了73.20%和74.54%。在菌劑添加量為0.5%與1.0%的試驗(yàn)組中,鯉魚的食糜蛋白酶活性與對(duì)照組相比分別提高了43.26%和44.05%(P<0.05),且在菌劑添加量為0.5%、1.0%與2.0%時(shí),其食糜淀粉酶活性與對(duì)照組相比分別提高了5.45%、5.06%與5.22%(P<0.05)。在餌料中分別添加0.5%、1.0%與2.0%的試驗(yàn)菌劑,鯉魚

8、在肝胰臟蛋白酶活性方面與對(duì)照組相比,分別提高了15.32%、14.23%與12.75%(P<0.05)。在餌料中分別添加1.0%與2.0%試驗(yàn)菌劑,其腸組織蛋白酶活性分別提高了25.16%和25.59%,而添加KL6菌劑對(duì)鯉魚肝胰臟與腸組織淀粉酶活性無(wú)顯著影響(P>0.05)。這些數(shù)據(jù)表明地衣芽孢桿菌KL6增強(qiáng)了鯉魚機(jī)體消化酶活性,進(jìn)而促進(jìn)了其生長(zhǎng)。綜上所述,本研究分離到的地衣芽孢桿菌KL6可以作為魚類規(guī)?；B(yǎng)殖中的一種耐高