低溫誘導(dǎo)過程中金釵石斛花芽蛋白質(zhì)差異表達(dá)研究.pdf

1、石斛是當(dāng)前國際花卉市場上最重要的花卉之一。金釵石斛為春化型植物，即必須要有一定的低溫處理才可以開花。本文采用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究了金釵石斛（Dendrobium nobile）低溫處理過程中蛋白質(zhì)差異表達(dá)的變化情況。
　　 1.選取金釵石斛（Dendrobium nobile）成熟苗置于人工氣候室中低溫處理，溫度設(shè)置為：16±1℃/10±1℃，12h/12h（白天/晚上），自然光照。分別在0d，10d和20d取其芽點(diǎn)，樣品液氮速凍

2、后放入-80℃冰箱保存以備提取蛋白。
　　 2.建立金釵石斛花芽蛋白雙向電泳體系：對樣品制備，IPG膠條的pH值范圍等進(jìn)行了優(yōu)化：采用酚抽提法提取蛋白；樣品與水化液1:40復(fù)溶；選用pH值5-8的膠條和12％的凝膠分離蛋白；采用考馬斯亮藍(lán)G-250染色，獲得了可識別約1000個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)的雙向電泳圖譜，且重復(fù)性好、分辨率高。
　　 3.研究了金釵石斛花芽在低溫誘導(dǎo)過程中蛋白質(zhì)差異表達(dá)的變化情況。結(jié)果表明：低溫處理后發(fā)現(xiàn)5

3、2個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)，其中上調(diào)表達(dá)的11個(gè)，下調(diào)表達(dá)的20個(gè)，波動表達(dá)的13個(gè)，具有質(zhì)的變化蛋白點(diǎn)有8個(gè)。對36個(gè)差異顯著蛋白質(zhì)斑點(diǎn)進(jìn)行基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜串聯(lián)質(zhì)譜分析，共獲得34個(gè)較好的二級質(zhì)譜圖，通過數(shù)據(jù)庫搜索，其中有34個(gè)蛋白質(zhì)得到了鑒定。這些蛋白質(zhì)主要與物質(zhì)和能量代謝，低溫響應(yīng)細(xì)胞防御，蛋白質(zhì)生物合成及細(xì)胞內(nèi)組分重建等生物學(xué)功能相關(guān)，以滿足植物生長發(fā)育所
　　 4.鑒定的差異蛋白中以細(xì)胞防御相關(guān)的蛋白最多，

4、包括小熱激蛋白、銅-鋅超氧化物歧化酶、異黃酮還原酶類蛋白、過氧化物蛋白、乳酸酰谷胱甘肽裂解酶、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶和抗壞血酸氧化酶；其次為能量代謝，包括葉綠素a/b結(jié)合蛋白、核酮糖1，5-2磷酸羧化/加氧酶、3-磷酸甘油醛脫氫酶、膜聯(lián)蛋白、植物凝集素和ATP結(jié)合蛋白；第三部分為蛋白質(zhì)代謝的蛋白（谷酰胺合成酶，泛素結(jié)合蛋白，富含甘氨酸的RNA-結(jié)合蛋白）；第四部分為細(xì)胞骨架蛋白（肌動蛋白1和肌動蛋白類蛋白）；另外還有兩個(gè)病毒相關(guān)蛋白（病程相關(guān)蛋