芝麻子葉再生體系的優(yōu)化及轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、試驗(yàn)以芝麻子葉為外植體,建立成熟的芝麻植株再生技術(shù)體系并進(jìn)行了優(yōu)化;同時(shí)開(kāi)展根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的芝麻轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究。初步確定轉(zhuǎn)基因體系中農(nóng)桿菌最佳侵染時(shí)間、抗生素篩選最佳濃度及處理時(shí)期等關(guān)鍵技術(shù)指標(biāo),獲得抗性植株6株。試驗(yàn)結(jié)果如下:
   1、以子葉為材料,通過(guò)不同激素類型和濃度下不定芽的誘導(dǎo)發(fā)生比率分析,得出芝麻子葉誘導(dǎo)叢生芽的最佳培養(yǎng)基是MS+6-BA5.0mg/L+IAA1.0mg/L+ABA1.0mg/L+AgN035.0m

2、g/L+蔗糖3%+瓊脂0.8%,子葉分化率可高達(dá)100%;6-BA是子葉膨大的關(guān)鍵因子;ABA是子葉出芽的主要因素。
   2、不定芽的增殖:以誘導(dǎo)出的不定芽為材料,在不同培養(yǎng)基類型下進(jìn)行試管苗增殖比較試驗(yàn),得出不定芽增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg/L+AgN032.5mg/L+蔗糖3%+瓊脂0.8%;叢生芽數(shù)最多為379個(gè)/處理,增殖率高達(dá)1184.38%。
   3、試管苗生根:將小苗分成單株接入生根培養(yǎng)

3、基生根,得出試管苗生根的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖3%+瓊脂0.8%,平均生根數(shù)最多為8.56條。
   4、頭孢霉素抑菌最佳濃度:濃度在0-500mg/L之間對(duì)芝麻子葉不定芽的分化率無(wú)明顯影響,且濃度為500mg/L時(shí)可完全抑制農(nóng)桿菌的生長(zhǎng),因此,頭孢霉素的最佳殺菌濃度定為500mg/L。
   5、轉(zhuǎn)基因抗性篩選中的最佳藥劑濃度:從外植體的卡那霉素(Km)和潮霉素(Hyg)抗性篩選試驗(yàn)可知,子

4、葉塊在Km70mg/L時(shí)分化率為8%,在Hyg40mg/L時(shí)分化率為14.81%;誘芽在Km70mg/L時(shí)芽增殖率為10.71%,在Hyg60mg/L時(shí)芽增殖率為20%;生根在Km20mg/L時(shí)平均生根條數(shù)為0.39條,在Hyg10mg/L時(shí)平均生根條數(shù)為0.5條;因此在以后的篩選試驗(yàn)中分別選擇亞致死濃度Km70、70、20mg/L,Hyg40、60、10mg/L;
   6、在芝麻子葉的遺傳轉(zhuǎn)化中可以省去預(yù)培養(yǎng)步驟,子葉適宜的

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