不同脫毒方法對(duì)紅江橙種性變異及脫黃龍病毒效果的影響.pdf

1、柑桔黃龍病的肆虐流行導(dǎo)致紅江橙瀕臨毀滅,同時(shí)紅江橙的嵌合特性也導(dǎo)致紅江橙果實(shí)性狀不穩(wěn)定,嚴(yán)重影響了紅江橙的發(fā)展。為此,建立一整套柑橘無(wú)病毒苗木繁育體系和明確紅江橙在組培過(guò)程中是否會(huì)發(fā)生分離是亟待解決的問(wèn)題。
　　 利用組織培養(yǎng)培育紅江橙的敗育胚以得到無(wú)毒苗；取成年感病莖尖和健康的紅江橙的莖尖為試材,進(jìn)行微芽嫁接得到無(wú)毒苗；采用離體莖段培養(yǎng)對(duì)紅江橙進(jìn)行快繁以及種質(zhì)保留；對(duì)帶毒材料和嫁接成活植株進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測(cè)；用S

2、SR分子標(biāo)記技術(shù)鑒定紅江橙莖段在組培過(guò)程中是否發(fā)生分離。主要的結(jié)果表明如下:
　　 1.本試驗(yàn)設(shè)想根據(jù)敗育胚保持母本的特性,通過(guò)胚性愈傷組織培育出無(wú)毒苗。但經(jīng)PCR檢測(cè),通過(guò)敗育胚所得幼苗為橙,用敗育胚培養(yǎng)無(wú)毒苗的設(shè)想不可行。
　　 2.紅江橙離體莖段材料用1/200消佳凈浸泡10min后,用無(wú)菌水沖洗數(shù)次,70％酒精處理1min,0.1％HgCl2處理15min,效果最佳,成功率達(dá)90％以上。
　　 3.通過(guò)改

3、進(jìn)的方法提高了莖尖嫁接成活率,倒“T”型法的嫁接成活率最低,只有10％,其次為橫壓法,為10.4％,成活率最高的為三角形法,成活率達(dá)到了28.6％,點(diǎn)插法成活率為20％.
　　 4.誘導(dǎo)紅江橙離體莖段出芽的最佳激素組合為:MT+6-BA1.0mg.L-1+IBA0.5mg.L-1+GA30.5mg.L-1;敗育胚通過(guò)胚性愈傷組織得無(wú)毒苗的激素組合為:MT+IAA0.2mg.1-1+6-BA0.5mg.1-1+ZT0.5mg.1-

4、1。
　　 5.在試驗(yàn)中技術(shù)鑒定發(fā)現(xiàn)紅江橙在組培過(guò)程中繼續(xù)發(fā)生分離,依靠組織培養(yǎng)對(duì)紅江橙進(jìn)行快繁以及種質(zhì)保留是不可行的。
　　 6.根據(jù)黃龍病病原的核苷酸序列設(shè)計(jì)PCR引物。脫毒前利用PCR對(duì)感病的紅江橙進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果擴(kuò)增到特異性電泳區(qū)帶,這與設(shè)計(jì)的擴(kuò)增片斷一致,證明是感染黃龍病病原的植株。
　　 7.對(duì)嫁接成活苗進(jìn)行了PCR未檢測(cè)到黃龍病的病原,說(shuō)明莖尖嫁接脫除黃龍病病原是有效的,可以為無(wú)病毒苗木的繁殖提供健康