甜葉菊分子標記遺傳連銷圖譜的構建.pdf

1、甜葉菊屬于小型的經(jīng)濟作物,其分子生物學研究剛剛起步。本文開展了甜葉菊分子標記遺傳連鎖圖譜的構建研究,為今后甜葉菊QTL定位、基因定位與克隆、基因組學研究和標記輔助選擇育種奠定基礎。具體研究結果如下:
　　 由于在構建甜葉菊分子圖譜時缺乏足夠的分子標記,本研究進行了基于甜葉菊轉錄組和基因組DNA的分子標記開發(fā)工作。實驗中利用現(xiàn)有的甜葉菊EST數(shù)據(jù)庫,篩選出其中特異SSR序列并分析其在數(shù)據(jù)庫中的分布特征,進而展開甜葉菊EST-SSR

2、功能性標記的開發(fā)與利用研究。在總長為3.75 Mb甜葉菊EST序列內(nèi)共確認得到5573條非冗余序列,平均每隔13.2 kb即含有一個EST-SSR。實驗中共篩選出285個EST-SSR序列,其中二核苷酸重復序列出現(xiàn)的頻率最高,占56.5％,四核苷酸重復序列最低,占0.3％。利用含SSR的EST序列,本研究共設計開發(fā)了58對EST-SSR引物。在分析前人建立的SRAP標記PCR體系基礎上,本試驗建立并優(yōu)化了甜葉菊SRAP-PCR反應體系,

3、其dNTPs濃度為0.2 mmol/L,Tap酶濃度為0.5 U/μl,DNA濃度為1.2μmol/L。參照前人的SRAP研究成果,設計了上下游引物各19條,形成了361對SRAP引物組合。
　　 利用兩個不同來源的甜葉菊栽培品種構建了含410個單株的F1分離群體,通過EST-SSR和SRAP標記在親本及F1分離群體篩選及分析,構建了總長分別為1215.2cM和647.8cM甜葉菊大葉材料和小葉材料兩張分子遺傳圖譜。大葉材料圖譜