子宮內(nèi)膜炎患牛子宮中MMPs的表達(dá)及其調(diào)控機(jī)制.pdf

1、Express“andReg!aticresslonanRegulationof0IEndometrialMMPsinBovineSufferingfromEndometritisThes“ubmittedtoheslsSUb釔DAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyCUiXiaoni(DepartmentofAn

2、imalScienceandVeterinaryMedicine)Supervisor：CaoRong—fengQingdao，ChinaJune，2013青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要子宮內(nèi)膜炎患牛子宮中MMPs及其調(diào)控機(jī)制摘要的表達(dá)煳663剿5Y27’l_子宮內(nèi)膜細(xì)胞外基質(zhì)對(duì)子宮生物學(xué)功能的維持非常重要，當(dāng)子宮患有疾病時(shí)子宮內(nèi)膜的細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)出現(xiàn)改變，除了與卵巢激素相關(guān)外，還受基質(zhì)金屬蛋白酶(M]％IPs)的調(diào)節(jié)。為了揭示M“M_P

3、s與奶牛子宮內(nèi)膜炎的關(guān)系和細(xì)胞水平調(diào)控機(jī)制，本試驗(yàn)采集患子宮內(nèi)膜炎的和未配種健康的奶牛子宮，觀察奶牛子宮組織形態(tài)學(xué)變化，分別用RTPCR檢測(cè)該組織中MMP2、MMP9和NF1(B的mRNA水平，用明膠酶譜法檢測(cè)MMP2和MMP9的酶活性。取未配種健康奶牛子宮內(nèi)膜，用植塊法培養(yǎng)奶牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞，純化傳至35代，將處于對(duì)數(shù)期的細(xì)胞隨機(jī)分為5組：空白對(duì)照組、10Itgml’1LPS組、20lagml‘1LPS組、30Pgml。1LPS組和

4、PDTC抑制組，每組3個(gè)重復(fù)，培養(yǎng)48h后，提取總RNA和膜蛋白，分別用RTPCR法和明膠酶譜法檢測(cè)TNFa、MMP2、MMP9和NF一心mRNA的表達(dá)，以及MMP2和MMP9的酶活性。試驗(yàn)結(jié)果如下：1子宮內(nèi)膜炎患牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞排列不整齊，粘膜下細(xì)胞基質(zhì)疏松、有炙洼細(xì)胞浸潤(rùn)。2子宮內(nèi)膜炎患牛子宮組織中MMP2、MMP9mRNA的表達(dá)弄口酶活性與對(duì)照組相比差異顯著(P005)：炎癥時(shí)NFrd3mRNA含量與對(duì)照組相比差異顯著(PO05

5、)。子宮內(nèi)膜炎患牛子宮組織NFrd3與MMPs變化一致，說明MMP2和MMP9參與牛子宮內(nèi)膜炎癥過程，牛子宮組織中MMP2和MMP9的增多可能與NFrB增多有關(guān)。3。用LPS刺激體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞，TNFc【升高、細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)明顯改變，表明本試驗(yàn)成功建立子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞炎癥模型。41Opgml。LPS組MMP一2、MMP一9和NF1(B較空白對(duì)照組顯著增加；20Ixgml。1LPS組和30Itgml。1LPS組MMP2、MMP9

6、乖NFrB較空白對(duì)照組極顯著增加。說明在體外培養(yǎng)的牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞發(fā)生炎癥時(shí)，MMP2和MMP9增多，且隨LPS濃度的升高M(jìn)MPs表達(dá)增加，MMP2和MMP9的表達(dá)可能與NFrB相關(guān)。5牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞先加PDTC再用1O嶺ml‘1LPS刺激，MMP2和MMP9的表達(dá)與對(duì)照組相比顯著減少，而NFvB的表達(dá)與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異，說明PDTC沒有減少NFrd3的表達(dá)，但可以抑制NF1(B指導(dǎo)蛋白的表達(dá)，使MMPs含量減少。上述體內(nèi)和體