基于未成熟合子胚的杉木胚性組織誘導和繼代的研究.pdf

1、本試驗以不同發(fā)育階段、不同基因型的未成熟杉木合子胚為外植體,研究了培養(yǎng)基、生長素、分裂素、脫落酸及油菜素內酯(BL)對杉木胚性組織誘導的影響,也探討了不同濃度組合的ABA和PEG4000對杉木體胚成熟的作用。通過本次試驗,確定了適合誘導杉木胚性組織的未成熟合子胚的發(fā)育階段、基因型。并針對不同的基因型,篩選出了胚性組織誘導率高的最優(yōu)化配方,解決了杉木胚性組織誘導率低的問題,為建立一個高效的杉木體胚再生系統(tǒng)奠定了基礎。本試驗主要研究結果如下

2、:
　　 1.不同發(fā)育階段的未成熟合子胚對杉木胚性組織的誘導有重要影響。其中受精和原胚階段的未成熟合子胚最適合用來誘導杉木胚性組織,裂生多胚和優(yōu)勢胚階段次之。由于較低的誘導率,胚器官分化及成熟期階段的未成熟合子胚已不宜作為誘導杉木胚性組織的外植體。
　　 2.在未成熟合子胚的不同發(fā)育階段,基因型對杉木胚性組織誘導的影響均達到了顯著水平。在杉木胚胎發(fā)育的受精階段,6個基因型杉木球果的平均誘導率依次為:己2(15.20％)、

3、洋21(11.38％)、丁79(10.40％)、丁34(6.9％)、洋38(6.04％)洋18(3.89％)。在杉木胚胎發(fā)育的原胚階段,6個基因型杉木球果的平均誘導率依此為:己2(11.37％)、丁79(8.18％)、洋38(8.09％)、丁34(5.80％)、洋21(4.47％)、洋18(3.17％)。在杉木胚胎發(fā)育的裂生多胚階段,6個基因型杉木球果的平均誘導率依此為:己2(4.02％)、丁79(3.44％)、丁34(2.63％)、洋

4、21(2.47％)、洋18(1.29％)、洋38(1.17％)。在杉木胚胎發(fā)育的優(yōu)勢胚階段,6個基因型杉木球果的平均誘導率依此為:己2(1.63％)、丁79(1.40％)、洋21(1.31％)、丁34(1.05％)、洋38(0.92％)、洋18(0.88％)。
　　 3.培養(yǎng)基和激素組合對杉木胚性組織的誘導也有重要影響,針對不同基因型,篩選出了誘導杉木胚性組織的最優(yōu)化配方,結果如下:
　　 (1)丁34在合子胚不同發(fā)育階

5、段的最優(yōu)化配方分別是:受精和原胚階段均為DCR培養(yǎng)基+NAA(1.0mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(0.5mg／L)+BL(0.05mg／L)。裂生多胚階段為DCR培養(yǎng)基+NAA(2.0mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(1.0mg／L)+BL(0.025mg／L)。優(yōu)勢胚階段為:DCR培養(yǎng)基+NAA(0.5mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L

6、)+ABA(1.0mg／L)+BL(0.05mg／L)。
　　 (2)丁79在合子胚不同發(fā)育階段的最優(yōu)化配方分別是:受精和原胚階段均為LP培養(yǎng)基+NAA(1.0mg／L)+6BA(0.5mg/L)+KT(0.5mg／L)+ABA(0.5mg／L)+BL(0.05mg／L)。裂生多胚階段為DCR培養(yǎng)基+NAA(2.0mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(0.5mg／L)+BL(0.05mg／L)。優(yōu)

7、勢胚階段為LP培養(yǎng)基+NAA(0.5mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(1.0mg／L)+BL(0.05mg／L)。
　　 (3)己2在合子胚不同發(fā)育階段的最優(yōu)化配方分別是:受精和原胚階段均為DCR培養(yǎng)基+NAA(0.5mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(0.5mg／L)+BL(0.025mg／L)。裂生多胚和優(yōu)勢胚階段為DCR培養(yǎng)基+NAA(1.0mg／L)+

8、KT(0.5mg／L)+ABA(0.5mg／L)+BL(0.05mg／L)。
　　 (4)洋18在合子胚不同發(fā)育階段的最優(yōu)化配方分別是:受精和原胚階段均為LP培養(yǎng)基+NAA(1.0mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(1.0mg／L)+BL(0.05mg／L)。裂生多胚階段為DCR培養(yǎng)基+NAA(1.0mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(0.5mg／L)+BL(0.05mg／L)。優(yōu)勢胚階

9、段為DCR+NAA(0.5mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(1.0mg／L)+BL(0.025mg／L)。
　　 (5)洋21在合子胚不同發(fā)育階段的最優(yōu)化配方分別是:受精和原胚階段均為LP培養(yǎng)基+NAA(0.5mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(1.0mg／L)+BL(0.025mg／L)。裂生多胚階段為:DCR培養(yǎng)基+NAA(1.0mg／L)+6BA(0.5

10、mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(0.5mg／L)+BL(0.05mg／L)。優(yōu)勢胚階段為LP培養(yǎng)基+NAA(2.0mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(1.0mg／L)+BL(0.025mg／L)。
　　 (6)洋38在合子胚不同發(fā)育階段的最優(yōu)化配方分別是:受精階段為LP培養(yǎng)基+NAA(0.5mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(1.0mg／L)+BL(0.025mg／L)。原胚

11、階段為LP培養(yǎng)基+NAA(0.5mg／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(1.0mg／L)+BL(0.025mg／L)。裂生多胚階段為LP培養(yǎng)基+NAA(2.0mg／L)+6BA(1.0mg／L)+ABA(0.5mg／L)+BL(0.05mg／L)。優(yōu)勢胚階段為DCR培養(yǎng)基+NAA(0.5rag／L)+6BA(0.5mg／L)+KT(0.5mg／L)+ABA(1.0mg／L)+BL(0.05mg／L)。