一株水稻紋枯病拮抗細(xì)菌及其抗菌物質(zhì)的研究.pdf

1、本研究以芽孢桿菌223菌株為主要實(shí)驗(yàn)材料,在形態(tài)學(xué)鑒定,生理生化鑒定和16S rDNA序列測(cè)定的基礎(chǔ)上,又利用其gyrB基因序列進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的構(gòu)建,對(duì)該菌株進(jìn)行菌種鑒定,發(fā)現(xiàn)該菌株與Bacillus pumilus和Bacillus safensis都非常接近,因此要得到明確的分類(lèi)結(jié)果還需采用更靈敏的方法作進(jìn)一步的鑒定。
　　 223菌株能產(chǎn)生對(duì)水稻紋枯病菌有強(qiáng)烈抑制作用的生物活性物質(zhì),我們采用以下方法對(duì)其進(jìn)行分離純化:用簡(jiǎn)化

2、的Davis培養(yǎng)基培養(yǎng)得到的發(fā)酵液,通過(guò)40％和60％兩級(jí)硫酸銨沉淀,Sephadex G-100分子篩分離和冷凍干燥濃縮等過(guò)程,得到純化的抗菌蛋白,將其命名為ZJU223。利用Tricine-SDS-PAGE測(cè)得該物質(zhì)的分子量在10.7-14.4KDa之間。采用Bradford法測(cè)得該抗菌物質(zhì)濃度為47.78μg/ml。通過(guò)質(zhì)譜分析,得到該抗菌蛋白的兩個(gè)肽段:肽段1-LVTSPTSGWDPKGLK(15aa)和肽段2-HYHRRPNL

3、THCQNLDNKK(18aa)。對(duì)抗菌物質(zhì)的部分理化性質(zhì)研究發(fā)現(xiàn),其對(duì)蛋白酶E和蛋白酶K敏感,對(duì)胃蛋白酶不敏感,經(jīng)65℃處理30min后仍具拮抗活性,pH2-pH12均有拮抗活性,其中最適pH在7左右。通過(guò)檢測(cè)抗菌物質(zhì)對(duì)幾種常見(jiàn)病原真菌的抑菌活性發(fā)現(xiàn),ZJU223對(duì)水稻紋枯病菌和棉花立枯病菌的抑制效果最強(qiáng),其次是水稻稻瘟病菌,對(duì)西瓜枯萎病菌和小麥赤霉病菌的抑制效果較弱,而對(duì)番茄灰霉病菌,草莓炭疽病菌,柿樹(shù)炭疽病菌,柑橘青霉病菌和啤酒酵