干出脅迫對(duì)孔石莼生理影響及LHCSR基因的克隆.pdf

1、孔石莼生長(zhǎng)在潮間帶的特殊環(huán)境中，所以經(jīng)常性的遭受干出脅迫。研究干出脅迫下孔石莼的生長(zhǎng)發(fā)育及體內(nèi)的生理生化變化，以及脅迫條件下分子水平的調(diào)控機(jī)制，將有助于了解孔石莼對(duì)干出脅迫的適應(yīng)機(jī)制。在眾多的脅迫相關(guān)蛋白中，光捕獲復(fù)合體(LHCSR)蛋白是存在于藻類中類囊體膜上的跨膜蛋白，可以結(jié)合不同的輔助色素，吸收光能并傳遞能量到光反應(yīng)中心，且在光保護(hù)機(jī)制中起著重要作用。當(dāng)藻體受到強(qiáng)光、低溫、干出等環(huán)境脅迫后該基因的表達(dá)量升高，進(jìn)而遣散藻體內(nèi)吸收的過(guò)

2、多光能，保證藻體光合作用的正常進(jìn)行。
　　 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)人工模擬干出條件研究孔石莼在不同干出條件下的生理生化反應(yīng)。以采自大連潮間帶的孔石莼為材料，測(cè)定在不同的干出時(shí)間(0 h、0.5 h、1 h、2 h、4 h、6 h)下其葉綠素a(Chla)含量、可溶性糖含量、脯氨酸(proline，Pro)含量、丙二醛(MDA)含量和過(guò)氧化物酶(POD)活性的變化。結(jié)果表明：干出脅迫會(huì)對(duì)孔石莼的生理生化過(guò)程產(chǎn)生明顯的影響。隨著干出時(shí)間的延長(zhǎng)，

3、孔石莼中葉綠素a含量呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)；丙二醛和可溶性糖的含量呈現(xiàn)緩慢的升高趨勢(shì)；過(guò)氧化物酶活性和脯氨酸含量呈現(xiàn)明顯的上升趨勢(shì)。
　　 采用RT-PCR和RACE技術(shù)成功克隆到孔石莼的光捕獲復(fù)合物(LHCSR)蛋白基因。該基因全長(zhǎng)1094 bp，ORF為636 bp，編碼211個(gè)氨基酸，5’端的非翻譯區(qū)UTR為77 bp，3’端的非翻譯區(qū)UTR為380 bp。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR，檢測(cè)在不同干出脅迫時(shí)LHCSR基因mRNA相對(duì)表達(dá)