四季桔試管苗離體保存過程的超微結(jié)構(gòu)觀察和鈣分布變化研究.pdf

1、本研究以四季桔成熟胚為外植體,建立四季桔離體再生體系,并進(jìn)行長期不繼代保存試管苗研究;同時(shí),對保存各個(gè)階段的試管苗進(jìn)行葉片超薄切片及透射電鏡的超微結(jié)構(gòu)觀察與鈣分布變化研究,試圖從微觀的角度探討四季桔試管苗長期保存機(jī)制。主要研究結(jié)果如下:
　　 1四季桔試管苗離體繁殖體系的建立
　　 以四季桔試管苗為材料誘導(dǎo)不定芽,建立了離體繁殖體系。并研究了取材部位、MS鹽濃度、糖濃度、不同激素組合及其配比和光照等因素對不定芽誘導(dǎo)的影響

2、。結(jié)果表明:以上胚軸為材料,形態(tài)學(xué)下端插入MS+6-BA1mg-1+NAA0.1mg·L-1培養(yǎng)基中,暗培養(yǎng)兩周后再在光照下培養(yǎng),不定芽誘導(dǎo)率最高,出芽率可達(dá)85.6％。一定時(shí)間的暗培養(yǎng)有助于外植體切口的愈傷組織快速形成,提高不定芽的發(fā)生率,而高濃度的6-BA和NAA對不定芽的誘導(dǎo)起抑制作用。不定芽增殖最佳培養(yǎng)基為1/2MS+1.0mg·L-1 BA+0.2mg·L-1KT,增殖系數(shù)達(dá)到7.29。生根最佳培養(yǎng)基為1/2 MS+0.2 m

3、g·L-1 IAA+0.5mg·L-1 IBA,生根率為77.8％。
　　 2四季桔試管苗長期不繼代離體保存研究
　　 以成熟珠心胚誘導(dǎo)的試管苗來保存四季桔種質(zhì)資源。本試驗(yàn)采用在MS空白培養(yǎng)上保存四季桔試管苗的方法,待培養(yǎng)基接近完全失水時(shí),往瓶中添加3gL-1瓊脂的半液體MS空白培養(yǎng)基。試驗(yàn)結(jié)果表明,四季桔試管苗無需添加生長調(diào)節(jié)劑就能長期保存,保存最長時(shí)間已達(dá)3年。保存1年的試管苗成活率為88.9％,保存2年存活率為73

4、.3％,保存3年時(shí)存活率為44.4％。
　　 3四季桔試管苗種質(zhì)保存過程中超微結(jié)構(gòu)觀察
　　 以四季桔珠心胚培養(yǎng)的試管苗為材料,取其葉片,并按保存時(shí)間的長短分為保存一個(gè)月、保存一年、兩年、三年4個(gè)階段,對各個(gè)時(shí)期的超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察和比較。研究結(jié)果表明:細(xì)胞衰老速度緩慢,保存前兩年未見葉綠體的明顯衰老特征,到第三年時(shí)才觀察到部分葉綠體外膜開始向外擴(kuò)張,破裂。葉肉細(xì)胞衰老速度緩慢從微觀的角度為四季桔試管苗長期保存提供了證據(jù)。

5、
　　 4四季桔試管苗種質(zhì)保存過程中鈣分布變化研究
　　 細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度與分布區(qū)域和植物衰老有一定的相關(guān)性,通過觀察細(xì)胞中ca2+水平的變化可以反映出植物細(xì)胞的衰老情況。本試驗(yàn)按保存一個(gè)月、保存一年、兩年、三年4個(gè)階段,對各個(gè)時(shí)期葉片的鈣分布變化進(jìn)行觀察研究。研究結(jié)果表明,隨著保存時(shí)間的增加,Ca2+從細(xì)胞液泡中轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)、核質(zhì)、細(xì)胞間隙中,細(xì)胞自身能調(diào)節(jié)Ca2+濃度,使其Ca2+濃度維持在一個(gè)較低水平,延緩其衰老