扇貝養(yǎng)殖海區(qū)真核浮游生物多樣性的研究.pdf

1、櫛孔扇貝(Chlamys farreri)是我國重要的海水養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)貝類,曾給我國北方水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)效益。自上世紀(jì)90年代,我國北方扇貝養(yǎng)殖海區(qū)連年暴發(fā)嚴(yán)重的櫛孔扇貝大規(guī)模死亡,經(jīng)濟(jì)損失巨大。已有的研究證明,造成扇貝夏季大規(guī)模死亡的病因是扇貝急性壞死癥(AVND),其病原為一種球形皰疹病毒——AVNV。已有的研究表明,海區(qū)中的浮游生物能攜帶AVNV,不同浮游生物的攜帶能力存在區(qū)別。為了明確養(yǎng)殖海區(qū)攜帶AVNV的主要浮游生物,有必

2、要首先對養(yǎng)殖海區(qū)浮游生物的季節(jié)性變化進(jìn)行分析,了解在AVNV流行傳播的關(guān)鍵時(shí)期海區(qū)浮游生物的主要種類,從而為確定與AVNV流行有關(guān)的浮游生物提供參考。
　　為了掌握櫛孔扇貝養(yǎng)殖海區(qū)真核浮游生物多樣性的情況及其變化,建立適合的研究方法。本研究首先采用PCR-DGGE技術(shù)分析了2009年6月到2010年6月期間采自青島流清河灣扇貝養(yǎng)殖海區(qū)的9個(gè)海水樣品中微型真核浮游生物的多樣性。依據(jù)18S rDNA可變區(qū)序列的DGGE分析結(jié)果顯示,流

3、清河灣扇貝養(yǎng)殖海區(qū)微型真核浮游生物包括甲藻、纖毛蟲、眼蟲、定鞭藻、硅藻、盤蜷蟲、隱藻、領(lǐng)鞭毛蟲、變形蟲和Cercozoan,其中甲藻類和纖毛類生物的最高豐度分別達(dá)41％和38.2％,是該海區(qū)的優(yōu)勢種類。對各月份DGGE譜帶聚類分析結(jié)果表明,2009年6、7、8、9月份微型浮游生物群落組成較為相似。此外,發(fā)現(xiàn)中肋骨條藻在扇貝發(fā)病前后均有分布,結(jié)合AVNV已有的研究結(jié)果,本研究認(rèn)為中肋骨條藻是AVNV水平傳播的參與者之一,但海區(qū)中廣泛分布的

4、甲藻和纖毛蟲與AVNV傳播的聯(lián)系還有必要進(jìn)一步研究。
　　為了掌握榮成桑溝灣真核浮游生物多樣性的情況,建立適合的研究方法。本研究通過構(gòu)建克隆文庫和PCR-RFLP技術(shù)對2010年9月24日采自榮成桑溝灣扇貝養(yǎng)殖海區(qū)表層的水樣中真核浮游生物多樣性進(jìn)行了分析。海水樣品依次經(jīng)25μm,3μm,0.22μm濾膜過濾分別收集超微型真核浮游生物和微型真核浮游生物,提取基因組DNA,依據(jù)18S rDNA可變區(qū)序列構(gòu)建克隆文庫,對陽性克隆子進(jìn)行P

5、CR-RFLP檢測,并且測序。研究結(jié)果表明,桑溝灣扇貝養(yǎng)殖海區(qū)超微型真核浮游生物包括Telonemia、褐藻門(Ochrophyta)、Myzozoa、Haptophyta、隱藻門(Cryptista)、纖毛門(Ciliophora)、領(lǐng)鞭蟲門(Choanozoa)、綠藻門(Chlorophyta)、Cercozoa、Opalozoa、盤蜷門(Labrinthulomycota)和Katablepharidophyta的各類浮游生物。微

6、型浮游生物包括Telonemia、褐藻門(Ochrophyta)、Haptophyta、隱藻門(Cryptista)、纖毛門(Ciliophora)、綠藻門(Chlorophyta)、領(lǐng)鞭蟲門(Choanozoa)和Cercozoa的各類浮游生物。無論是超微型還是微型真核浮游生物中,褐藻門(Ochrophyta)、纖毛門(Ciliophora)和綠藻門(Chlorophyta)都是主要的類群,這些物種在扇貝養(yǎng)殖海區(qū)中具有不同的功能,既有

7、扇貝的餌料生物,也有赤潮生物。中肋骨條藻在該海區(qū)微型真核浮游生物群落中被發(fā)現(xiàn),是已被證明的可以攜帶AVNV的浮游微藻。
　　為了了解青島流清河灣和榮成桑溝灣超微型真核浮游生物的多樣性,比較超微型真核浮游生物群落的周年變化。本研究采用DGGE技術(shù)對2010年5月到2011年4月間采自兩個(gè)扇貝養(yǎng)殖海區(qū)表層的海水進(jìn)行分析。研究結(jié)果表明,桑溝灣扇貝養(yǎng)殖海區(qū)超微型真核浮游生物多樣性高于流清河灣。對兩個(gè)海區(qū)各月份的DGGE圖譜進(jìn)行聚類分析,結(jié)