小麥TaCIPK9和TaCIPK23基因的分離及其抗非生物脅迫的功能分析.pdf

1、小麥?zhǔn)鞘澜缟现匾募Z食作物，在我國(guó)，小麥約占糧食總消費(fèi)量的一半。干旱和高鹽是限制小麥產(chǎn)量和品質(zhì)的最主要非生物逆境要素。研究小麥響應(yīng)逆境的分子機(jī)制對(duì)小麥抗逆分子育種有著重要意義。研究發(fā)現(xiàn)擬南芥CBL-CIPK復(fù)合體在與非生物逆境（如冷、ABA、鹽、滲透脅迫、低K+濃度、高pH等）相關(guān)的鈣離子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起到重要作用。因此將小麥CBL和CIPK基因作為研究抗逆分子育種的候選基因。本研究主要分離克隆了小麥TaCIPK9和TaCIPK23基因；構(gòu)

2、建酵母表達(dá)載體 pGADT7-TaCIPK9、pGADT7-TaCIPK23，使用酵母雙雜交和β-半乳糖苷酶活性測(cè)量的手段研究它們與本實(shí)驗(yàn)室之前分離的小麥TaCBLs的相互作用；構(gòu)建轉(zhuǎn)酵母表達(dá)載體pYES2-TaCIPK9和pYES2-TaCIPK23，轉(zhuǎn)入釀酒酵母，通過(guò)各種逆境處理獲得它們抗非生物脅迫的初步結(jié)果，為后續(xù)的轉(zhuǎn)基因植株研究提供了基礎(chǔ)。
　　本研究取得的結(jié)果如下：
　　(1)分離克隆出小麥TaCIPK9和TaCI

3、PK23基因；
　　(2)成功地構(gòu)建了用于酵母雙雜交的酵母表達(dá)載體 pGADT7-TaCIPK9和pGADT7-TaCIPK23。利用LiAc酵母轉(zhuǎn)化辦法，分別轉(zhuǎn)入酵母菌株AH109和Y187，雙雜交結(jié)果和β-半乳糖苷酶活性檢測(cè)結(jié)果表明TaCIPK9與 TaCBL3、TaCBL4有最強(qiáng)的相互作用，TaCIPK23與TaCBL3有最強(qiáng)的相互作用。
　　(3)成功構(gòu)建了用于釀酒酵母轉(zhuǎn)化的表達(dá)載體 pYES2-TaCIPK9和 p