低溫馴化下黃粉蟲抗凍蛋白基因應激表達.pdf

1、黃粉蟲在遇到低溫時會增高抗凍蛋白的表達，然而抗凍蛋白是一個基因家族，其中蛋白的長度和結構存在著差異。在生物體的適應過程中，哪種抗凍蛋白的基因的表達量更高，尚不清楚。本文對黃粉蟲抗凍蛋白基因家族，保守序列長度存在差異的基因進行研究，選取了黃粉蟲抗凍蛋白基因家族中三個具有代表性的基因，NCBI數(shù)據庫編號分別為：AF160497，AF160496，AF160494，進行了實時熒光定量PCR，測定其基因相對表達水平。處理如下,4℃下馴化4天、8

2、天、16天、24后，對上述三個基因的表達量進行了測定，同時還進行了4℃下低溫馴化4天、8天、16天、24天，經-11℃處理后，黃粉蟲死亡率的統(tǒng)計。此外還進行了抗凍蛋白的在真核細胞SF-9中的表達試驗。主要研究內容及結果如下：
　　 ⑴隨著黃粉蟲在4℃下的處理時間延長，經-11℃處理后，黃粉蟲的死亡率呈現(xiàn)下降的趨勢,4天、8天、16天都有明顯的降低,24天處理樣本與16天處理樣本的差異不顯著。
　　 ⑵黃粉蟲4℃下馴化4天

3、、8天、16天，分別取樣對基因Af160497進行RTPCR?；駻f160497的表達量，在4天取樣點表達量劇烈上升，而到了8天左右表達量則低于4天，經過16天處理后基因的表達量繼續(xù)增加，總體呈現(xiàn)上升趨勢。
　　 ⑶黃粉蟲4℃下馴化4天、8天、16天，分別取樣對基因AF160496進行RTPCR?；駻F160496的表達量，在4天取樣點有了較大提升，在8天和16天取樣現(xiàn)點，它的表達量持續(xù)走低。
　　 ⑷黃粉蟲4℃下馴

4、化4天、8天、16天，分別取樣對基因AF160494進行RTPCR。基因AF160494的表達量，在4天的取樣點也是有了很大提升，在8天取樣的點表現(xiàn)出與基因Af160497表達量降低，在16天取樣點，該基因又恢復到4天取樣點的表達水平。
　　 ⑸通過對三個基因的對比，基因AF160494的整體表達量高于其他兩個處于主導地位，AF160496、AF160497基因表達水平相當，顯著低于基因AF160494的表達水平。
　　

5、 ⑹檢測了冷馴化對低溫死亡率的效應和對不同類型的抗凍蛋白家族成員基因表達量的影響。結果表明，冷馴化可以顯著降低黃粉蟲幼蟲的低溫死亡率和提高不同類型抗凍蛋白基因的表達量。其中，長的抗凍蛋白和低溫死亡率的相關關系最為明顯。說明不同的抗凍蛋白家族成員的功能有明顯的分化，為進一步理解抗凍蛋白的活性和利用抗凍蛋白提供了新的認識。
　　 ⑺真核SF-9細胞表達抗凍蛋白過程中，完成了載體構建及桿粒的形成，并表達出一定蛋白，但得到的蛋白分子量大