黑木相思不同優(yōu)良無性系組培快繁技術(shù)比較研究.pdf

1、黑木相思(Acacia melanoxylon)屬含羞草科(Mimosaceae)金合歡屬(Acacia Mill.),是相思類最高大喬木之一。本試驗以黑木相思10個不同優(yōu)良無性系為研究對象,分別從直接器官發(fā)生再生植株和間接器官發(fā)生再生植株兩個方面探索不同無性系組培過程中每個技術(shù)環(huán)節(jié),為完善黑木相思組織培養(yǎng)快繁技術(shù)、促進組培產(chǎn)業(yè)化及在園林綠化方面的大面積推廣提供科學(xué)依據(jù)和技術(shù)支撐。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.黑木相思無菌體系的

2、建立。采用隨機區(qū)組設(shè)計,分析三種消毒方法對不同無性系半木質(zhì)化莖段污染率的影響,結(jié)果表明,無性系FM1、FM2、FM5、FM6、FM9、FM18、FM19、FM21的外植體在75％酒精(30s)+2％次氯酸鈉(10min)+0.1％升汞(8min)上處理污染率最低,無性系FM3、FM12的外植體在75％酒精(30s)+0.1％升汞(8min)上處理污染率最低。
　　 2.黑木相思不同無性系腋芽誘導(dǎo)。采用正交試驗設(shè)計,分析不同培養(yǎng)基

3、對黑木相思不同無性系腋芽誘導(dǎo)的影響,結(jié)果表明,不同培養(yǎng)基對同一無性系腋芽誘導(dǎo)有顯著差異,同一培養(yǎng)基對不同無性系腋芽誘導(dǎo)亦存在顯著差異。整體分析影響各無性系腋芽誘導(dǎo)率的因素,以培養(yǎng)基類型的影響最大,其次6-BA,NAA影響最小。各無性系誘導(dǎo)率差別較大,整體由高到底順序為:FM12>FM6>FM2>FM19>FM3>FM9>FM21>FM1>FM5>FM18。篩選各無性系不定芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基,其中無性系FM1、FM6、FM19的培養(yǎng)基為改

4、良MS+6-BA2.0mg／L+NAA0.3mg／L,無性系FM2、FM5、FM12的培養(yǎng)基是MS+6-BA2.0mg／L+NAA0.3mg／L,無性系FM9、FM18、FM21的培養(yǎng)基是MS+6-BA2.5mg／L+NAA0.4mg／L,無性系FM3的培養(yǎng)基是MS+6-BA2.0mg／L+NAA0.4mg／t.。
　　 3.黑木相思不同無性系組培苗增殖。采用正交試驗設(shè)計,分析不同激素配比對組培苗增殖系數(shù)的影響,結(jié)果表明,不同培

5、養(yǎng)基對同一無性系組培苗增殖系數(shù)有顯著差異,同一培養(yǎng)基對不同無性系組培苗增殖亦存在顯著差異。整體分析影響各無性系增殖系數(shù)的因素,以6-BA對增殖系數(shù)影響最大,其次是NAA,GA對各無性系增殖影響最小。不同無性系間整體平均增殖系數(shù)由高到低順序為:FM6>FM1>FM19>FM5>FM9>FM21>FM2>FM3>FM12>FM18。篩選各無性系不定芽的最佳增殖培養(yǎng)基,其中無性系FM1、FM3的培養(yǎng)基是MS+6-BA0.3mg／L+NAA0.

6、2mg／L+GA0.3mg／L,無性系FM2、FM6的培養(yǎng)基是MS+6BA0.3mg／L+NAA0.2mg／L+GA0.1mg／L,無性系FM5、FM21的培養(yǎng)基是MS+6-BA0.3mg／L+NAA0.1mg／L+GA0.3mg／L,無性系FM12、FM19的培養(yǎng)基是MS+6-BA0.5mg／L+NAA0.2mg／L+GA0.2mg／L,無性系FM9的繼代最佳培養(yǎng)基是MS+6·BA0.3mg／L+NAA0.05mg／L+GA0.2mg

7、／L,無性系FM18繼代最佳培養(yǎng)基是:MS+6-BA0.3mg／L+NAA0.1 mg／L+GA0.1 mg／L。
　　 4.繼代次數(shù)對黑木相思不同無性系組培苗的增殖影響。采用隨機區(qū)組設(shè)計,隨著繼代次數(shù)的增加,各無性系組培苗整體呈現(xiàn)出相對一致的規(guī)律,即其增殖系數(shù)均先增大后減小。其中無性系FM1、FM3、FM6、FM9、FM21組培苗在第4次繼代時增殖系數(shù)最大,無性系FM2、FM5、FM19在第5次繼代時增殖系數(shù)最大,無性系FM1

8、2、FM18在第3次繼代時增殖系數(shù)最大。
　　 5.黑木相思不同無性系組培苗生根。采用正交試驗設(shè)計,分析不同生長素配比對組培苗生根率的影響。結(jié)果表明,不同培養(yǎng)基對同一無性系組培苗生根率有顯著差異,同一培養(yǎng)基對不同無性系組培苗生根率亦存在顯著差異。整體分析影響各無性系生根率的因素,以生長素IBA、ABT的效果最顯著,NAA影響效果較小。不同無性系間整體平均生根率由高到低順序為:FM2>FM5>FM6>FM3>FM1>FM21>FM

9、18>FM19>FM12>FM9。篩選各無性系組培苗的最佳生根培養(yǎng)基,無性系FM1、FM21的培養(yǎng)基是1／2MS+IBA0.5mg／L+ABT1.0mg／L+NAA0.4mg／L,無性系FM2、FM3的培養(yǎng)基是1／2MS+IBA0.5mg／L+ABT1.5mg／L+NAA0.4mg／L,無性系FM9、FM12的培養(yǎng)基是1／2MS+IBA0.5mg／L+ABT0.5mg／L+NAA0.4mg／L,無性系FM5的生根培養(yǎng)基是1／2MS+IB

10、A0.7mg／L+ABT1.5mg／L+NAA0.4mg／L,無性系FM6生根培養(yǎng)基是1／2MS+IBA0.7mg／L+ABT1.5mg／L+NAA0.2mg／L,無性系FM19生根的最佳培養(yǎng)基是:1／2MS+IBA0.5mg／L+ABT1.5mg／L。
　　 6.兩步生根法對無性系FM1、FM6生根率的影響。無性系FM1、FM6生根率在生長素IBA濃度為2mg／L,暗培養(yǎng)5d時達最高,分別達100％、97.5％,生根效果最好,

11、根粗、長。
　　 7.黑木相思不同無性系移栽成活?；|(zhì)黃心土:泥炭土2:1時的成活率高于黃心土:蛭石=2:1時的成活率,且幼苗的生長狀況也較后者好。不同無性系的成活率各不相同,無性系FM5成活率最高為99％,而FM18成活率最低,僅有57％。10個無性系的成活率大小為:FM5>FM21>FM1>FM3>FM6>FM2>FM19>FM9>FM12>FM18。
　　 8.黑木相思不同外植體消毒。嫩莖段的最佳消毒處理是:75％

12、乙醇處理20s+0.1％升汞處理7min,莖尖的最佳消毒處理是:75％乙醇處理10s+0.1％升汞處理3min,幼葉的最佳消毒處理是:75％乙醇處理10s+0.1％升汞處理4min。
　　 9.黑木相思不同無性系愈傷組織誘導(dǎo)。采用正交試驗設(shè)計,分析不同激素配比對不同無性系的三種外植體的誘導(dǎo)率。結(jié)果表明,不同培養(yǎng)基對同一無性系的不同外植體愈傷誘導(dǎo)各有差異,同一培養(yǎng)基對同一無性系的不同外植體愈傷誘導(dǎo)也存在差異,同一培養(yǎng)基對不同無性系

13、愈傷誘導(dǎo)亦存在顯著差異。三種材料中以莖尖愈傷組織誘導(dǎo)效果最好,其次幼葉,嫩莖段誘導(dǎo)率最低。整體分析影響因素大小,以2,4-D對愈傷誘導(dǎo)影響作用最大,其次是6-BA,NAA影響作用最小。不同無性系的誘導(dǎo)情況差異較大,無性系FM1、FM2、FM3、FM6、FM9、FM12、FM18、FM19均能誘導(dǎo)愈傷組織,無性系FM5、FM21沒能成功誘導(dǎo)出愈傷組織。
　　 10.黑木相思不同無性系愈傷組織繼代。設(shè)計5種培養(yǎng)基,結(jié)果表明,2,4-

14、D和6-BA的激素組合適合黑木相思愈傷組織繼代。無性系FM1、FM2、FM3、FM9、FM19愈傷組織繼代最適培養(yǎng)基為MS+2,4-D0.5mg／L+6-BA2.0 mg／L,無性系FM6、FM12在培養(yǎng)基MS+2,4-D0.2mg／L+6-BA1.0 mg／L中長勢最好,無性系FM18愈傷組織在所有處理中都不生長,最終褐化嚴(yán)重死亡。
　　 11.抗褐化劑對愈傷組織褐化的影響。以無性系FM6愈傷組織為材料,結(jié)果表明抑制愈傷組織褐

15、化效果最好的是維生素C,濃度是100mg／L時,褐化率最小為29.3％。
　　 12.黑木相思不同無性系愈傷組織分化。采用正交試驗設(shè)計,分析不同激素配比對不同無性系愈傷組織分化的影響,結(jié)果表明,不同培養(yǎng)基對同一無性系愈傷組織分化有顯著差異,同一培養(yǎng)基對不同無性系愈傷組織分化亦存在差異。整體分析影響愈傷分化率的因素,發(fā)現(xiàn)6-BA的影響效果大于NAA的影響效果,其中以二者均為低濃度時愈傷分化率較高。不同無性系間整體愈傷組織分化率大小