肉牛早孕因子的活性檢測(cè)及分離純化.pdf

1、早孕因子（Early Pregnancy Factor，EPF）是存在于妊娠早期母體血清中的一種具有免疫抑制及生長(zhǎng)調(diào)節(jié)作用的蛋白質(zhì)。1974年由澳大利亞學(xué)者M(jìn)orton等在孕鼠血清中首次發(fā)現(xiàn)，由于在小鼠交配6 h后就可檢測(cè)到，因此被命名為早孕因子。早孕因子是哺乳動(dòng)物受精后最早在血液中出現(xiàn)的具有妊娠相關(guān)免疫抑制活性的多肽物質(zhì)。普遍認(rèn)為它是熱激蛋白家族成員伴侶蛋白10的同系物?？捎肊玫瑰花環(huán)抑制試驗(yàn)（E Rosette Inhibition

2、 Test，E-RIT）做生物學(xué)鑒定。妊娠早期分泌的EPF能阻止母體的免疫系統(tǒng)將胎兒識(shí)別為外源物質(zhì)，及對(duì)胎兒產(chǎn)生應(yīng)答。早孕因子的產(chǎn)生依賴于一個(gè)合適的激素環(huán)境，與卵巢、輸卵管、受精卵、胎盤(pán)、垂體等有關(guān)。早孕因子在動(dòng)物受精數(shù)小時(shí)后即可在母體血液中被檢測(cè)出來(lái)，在整個(gè)孕期持續(xù)存在。在母體分娩以后EPF隨即消失。EPF可以用于早期妊娠診斷，預(yù)測(cè)早期胚胎死亡與流產(chǎn)、鑒定胚胎移植效果、監(jiān)測(cè)胎兒的狀態(tài)等，其次，EPF作為一種溫和的、天然的免疫抑制物，在

3、治療自身免疫性疾病、預(yù)防器官移植后排斥反應(yīng)等領(lǐng)域有研究?jī)r(jià)值。因此研究這種蛋白質(zhì)對(duì)牛業(yè)生產(chǎn)具有重要意義。
　　 本實(shí)驗(yàn)采集授精后20 h,25 h與30 h后的肉牛血清和陰道粘液，嘗試建立簡(jiǎn)單有效的E玫瑰花環(huán)抑制實(shí)驗(yàn)，以快速準(zhǔn)確地檢測(cè)早孕因子活性，并測(cè)定血液及陰道粘液中早孕因子的最早可檢測(cè)時(shí)間，以確定進(jìn)行早期妊娠檢測(cè)的最早時(shí)機(jī)和最佳方法。采集妊娠1～9個(gè)月健康孕牛血清，通過(guò)DEAE-52離子交換層析，Con A-Sepharose

4、 4B親和層析和Heparin Sepharose Cl 6B親和層析分離純化技術(shù)，從孕牛血清中分離出純化的EPF。用E玫瑰花環(huán)抑制實(shí)驗(yàn)對(duì)各階段產(chǎn)物EPF活性進(jìn)行檢測(cè)。采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）和丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳對(duì)純化的EPF等電點(diǎn)進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果表明，授精后的肉牛在20h之間能夠檢測(cè)出早孕因子活性，陰道粘液的可檢測(cè)時(shí)間是25h，懷孕牛和未懷孕牛血清的E玫瑰花環(huán)抑制滴度差異顯著（P＜0.05