離體培養(yǎng)大巖桐花初切塊花芽分化過程中開花相關基因表達及內源激素的定量分析.pdf

1、植物激素參與植物生長發(fā)育的整個過程，包括種子萌發(fā)、莖的伸長、花及果實的發(fā)育等。大巖桐是苦苣苔科的一種日中性植物，開花無需春化作用，從播種到開花僅需3-4個月。我們已經建立了赤霉素和細胞分裂素協(xié)同促進離體培養(yǎng)大巖桐花被切塊直接再生花芽的體系。為了進一步探討花被切塊直接再生花過程中花發(fā)育相關基因以及內源植物激素的變化規(guī)律，我們利用實時熒光定量PCR技術，測定培養(yǎng)不同時間的大巖桐花被、幼葉切塊中SsSOCla和SsSPY的相對表達量；并通過酶

2、聯(lián)免疫吸附法測定不同培養(yǎng)時間花被、幼葉切塊中內源激素的含量。
　　 主要研究結果如下：
　　 1.根據大巖桐SsActin、SsSPY和SsSOCla的相對保守核苷酸序列設計引物，以SsActin為內參，大巖桐花瓣、花萼、幼葉切塊離體培養(yǎng)0-21d期間，進行SsSPY和SsSOCla基因實時熒光定量表達分析。結果表明：在花瓣、花萼、幼葉培養(yǎng)初期，SsSOCla基因表達呈現(xiàn)上升的趨勢，在花瓣和花萼中SsSOCla基因表達峰

3、值都出現(xiàn)在15d，花瓣中SsSOCla基因的相對表達量高達12.04;而幼葉中SsSOCla基因表達峰值出現(xiàn)在18d，相對表達量僅為5.82。在花瓣、花萼、幼葉培養(yǎng)初期，SsSPY的表達量呈上升趨勢，至10d時，花瓣與幼葉中均出現(xiàn)表達高峰，相對表達量分別為7.46和6.19，之后均下降；花萼中的峰值出現(xiàn)在15d時，相對表達量僅為5.94。
　　 2.用酶聯(lián)免疫方法，測定了培養(yǎng)不同時間大巖桐花瓣、花萼、幼葉切塊4種內源植物激素的含

4、量，結果表明：脫落酸(ABA)在材料中的含量明顯的高于其它3種激素，而幼葉中的含量又比花瓣與花萼中高很多，最高達2622050pg/g(18d)；培養(yǎng)15d以后，玉米素核苷(ZR)的含量變化出現(xiàn)了分歧，花萼與幼葉中都在上升，而花瓣始終維持在1600pg/g左右；吲哚乙酸（IAA）的含量是最低的，整體而言，花瓣與花萼的含量要高于幼葉，其含量分別可高達0.30pg/g和0.25pg/g，而幼葉中僅達0.20pg/g;赤霉素(GA)在花瓣中的