陸地棉耐鹽相關(guān)基因(GhPTAC、GhGnT)克隆及其表達分析.pdf

1、土地鹽堿化已成為一個世界關(guān)注的焦點問題,解決土地鹽堿化問題已成為全球性難題。在輕度或部分中度鹽堿地上種植比較耐鹽的作物,是一種簡便、快捷、經(jīng)濟有效的改良措施。棉花作為重要的經(jīng)濟作物和鹽堿的先鋒作物,已成為鹽堿地改良及其相關(guān)研究的重要研究材料。通過分子生物學手段研究棉花耐鹽基因及作用機制,從而為提高棉花耐鹽能力,培育耐鹽品種開辟新的途徑。本研究以耐鹽材料中9806和鹽敏感材料中S9612為實驗材料,通過基因芯片技術(shù)及抑制性差減文庫技術(shù)篩選

2、到兩個耐鹽相關(guān)基因,利用RACE及RT-PCR技術(shù)克隆了它們的cDNA全長,命名為GhPTAC和GhGnT。利用熒光定量PCR技術(shù)對兩個基因做了耐鹽相關(guān)性表達分析,并通過GFP亞細胞定位和酵母表達技術(shù)對GhGnT基因做了進一步研究。具體研究成果如下:
　　 1獲得2個耐鹽相關(guān)基因cDNA全長
　　 利用RACE及RT-PCR技術(shù)獲得GhPTAC和GhGnT基因cDNA全長序列。其中GhPTAC基因cDNA全長1564bp

3、,它包括5’-UTR41bp,完整開放閱讀框1038bp,3'-UTR485bp,編碼345個氨基酸殘基的多肽。GhGnT基因cDNA全長2140bp,它包括5'-UTR587bp,完整開放閱讀框13531313和3'-UTR200bp,編碼450個氨基酸殘基的多肽。
　　 2 Real-time PCR分析
　　 種子萌發(fā)期熒光定量結(jié)果顯示:在一定范圍內(nèi),隨著鹽脅迫程度的增加,GhPTAC基因在中S9612中表達量逐漸

4、上升,在中9806中的表達量逐漸下降；GhGnT基因在兩個材料中表達量都是先上升,再下降。苗期熒光定量結(jié)果顯示:GhPTAC基因在兩個材料中受鹽誘導上調(diào)表達,但在中9806中的表達量明顯高于中S9612；GhGnT基因在兩個材料中受鹽誘導上調(diào)表達,在中S9612中對鹽脅迫應(yīng)答較快,但表達量低于中9806。熒光定量檢測發(fā)現(xiàn),兩個基因的表達量變化與鹽脅迫密切相關(guān)。
　　 3 GhGnT基因編碼蛋白的亞細胞定位
　　 構(gòu)建PB