仔兔大腸桿菌病小腸黏膜免疫變化及治療效果觀察.pdf

1、本研究為探討人工感染大腸桿菌病仔兔小腸黏膜免疫變化及其治療效果觀察。將40只健康仔兔隨機(jī)分為對(duì)照組、大腸桿菌感染組、慶大霉素治療組、乳酸菌素治療組四組。對(duì)照組，于試驗(yàn)當(dāng)天腹腔注射生理鹽水2ml；大腸桿菌感染組，腹腔注射大腸桿菌培養(yǎng)液2ml；慶大霉素治療組，腹腔注射大腸桿菌培養(yǎng)液2ml，出現(xiàn)大腸桿菌病臨床癥狀后(注射菌液后第二天)每天肌注慶大霉素0.5ml(20000u)/只，連續(xù)注射三天；乳酸菌素治療組，腹腔注射大腸桿菌培養(yǎng)液2ml，出

2、現(xiàn)癥狀后每天口服乳酸菌素1片(400mg/pc)，連續(xù)三天。隔一天每組采血，各取三只宰殺，測(cè)定血液內(nèi)毒素含量，剖檢后采取十二指腸和空腸測(cè)量了小腸黏膜厚度、隱窩深度和絨毛長(zhǎng)度，測(cè)定上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞，小腸黏膜中5-HT陽(yáng)性細(xì)胞、SS陽(yáng)性細(xì)胞、肥大細(xì)胞及杯狀細(xì)胞的數(shù)量變化。
　　 采用H.E染色方法測(cè)量了小腸黏膜厚度、隱窩深度和絨毛長(zhǎng)度，并采用掃描電鏡觀察空腸結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果顯示，感染大腸桿菌后，第3天大腸桿菌感染組小腸黏膜厚度、絨毛長(zhǎng)

3、度和絨毛長(zhǎng)度與隱窩深度比值顯著減少(P<0.05)，掃描電鏡下空腸頂端絨毛脫落，微絨毛脫落。慶大霉素治療組和乳酸菌素治療組腸道損傷減輕。
　　 采用H.E染色測(cè)定了IEL的數(shù)量。感染大腸桿菌后，家兔腸道中IEL的數(shù)量有所增加。第3天大腸桿菌感染組IEL細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比增加極顯著(P<0.01)，與慶大霉素治療組和乳酸菌治療素組相比增加顯著(P<0.05)，慶大霉素治療組和乳酸菌素治療組與對(duì)照組相比增加顯著(P<0.05)；第

4、5天大腸桿菌感染組十二指腸IEL細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比增加顯著(P<0.05)，慶大霉素治療組和乳酸菌素治療組與對(duì)照組相比差異不顯著(P>0.05)。
　　 采用免疫組化技術(shù)(SABC法)研究了家兔生長(zhǎng)抑素(SS)陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量變化。感染大腸桿菌后，家兔腸道中SS的數(shù)量增加。第3天大腸桿菌感染組SS陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量與對(duì)照組相比增加極顯著(P<0.01)，十二指腸SS陽(yáng)性細(xì)胞與慶大霉素治療組和乳酸菌素治療組相比增加顯著(P<0.05)

5、，空腸SS陽(yáng)性細(xì)胞與乳酸菌治療素組相比增加顯著(P<0.05)。第5天大腸桿菌感染組十二指腸SS陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量與對(duì)照組相比增加顯著(P<0.05)，慶大霉素治療組和乳酸菌素治療組與對(duì)照組相比差異不顯著(P>0.05)。
　　 采用免疫組化技術(shù)(SABC法)研究了家兔小腸中5-HT陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量變化。感染大腸桿菌后，第3天大腸桿菌感染組5-HT陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量與對(duì)照組相比增加顯著(P<0.05)，十二指腸5-HT陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量與慶大霉

6、素治療組和乳酸菌素治療組相比增加顯著(P<0.05)，空腸5-HT陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量與乳酸菌素治療組相比增加顯著(P<0.05)，慶大霉素治療組與對(duì)照組相比增加顯著(P<0.05)。第5天各組差異不顯著(P>0.05)。
　　 應(yīng)用甲苯胺藍(lán)染色技術(shù)研究了家兔小腸中肥大細(xì)胞數(shù)量的變化。結(jié)果顯示，感染大腸桿菌后，第3天大腸桿菌感染組肥大細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比減少極顯著(P<0.01)，慶大霉素治療組和乳酸菌素治療組與對(duì)照組相比減少顯著(P<

7、0.05)。第5天大腸桿菌感染組肥大細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比減少顯著(P<0.05)，十二指腸肥大細(xì)胞數(shù)量與慶大霉素治療組和乳酸菌素治療組相比減少顯著(P<0.05)，慶大霉素治療組和乳酸菌素治療組與對(duì)照組相比差異不顯著(P>0.05)。
　　 應(yīng)用高碘酸-Schiff氏試劑顯色法(PAS法)研究了家兔小腸中杯狀細(xì)胞數(shù)量的變化。結(jié)果顯示，感染大腸桿菌后，第1天大腸桿菌感染組十二指腸杯狀細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比增加顯著(P<0.05)。第

8、3天大腸桿菌感染組杯狀細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比增加極顯著(P<0.01)，大腸桿菌感染組十二指腸杯狀細(xì)胞數(shù)量與慶大霉素治療組和乳酸菌治療素組相比增加顯著(P<0.05)，慶大霉素治療組與對(duì)照組相比增加顯著(P<0.05)。第5天大腸桿菌感染組十二指腸杯狀細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比增加顯著(P<0.05)，慶大霉素治療組和乳酸菌素治療組與對(duì)照組相比差異不顯著(P>0.05)。
　　 應(yīng)用終點(diǎn)顯色基質(zhì)法研究了血液中內(nèi)毒素的變化。結(jié)果顯示，內(nèi)毒

9、素檢測(cè)大腸桿菌感染組于注射菌液后第1天開(kāi)始檢測(cè)出內(nèi)毒素超過(guò)對(duì)照組，第5天達(dá)到高峰，第7天回歸到正常水平。
　　 結(jié)果表明，仔兔感染大腸桿菌病后，能引起小腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞、杯狀細(xì)胞、肥大細(xì)胞、5-HT和SS陽(yáng)性細(xì)胞在小腸內(nèi)的分布及其數(shù)量變化，從而引起黏膜免疫；大腸桿菌能引起小腸黏膜結(jié)構(gòu)變化，并形成毒血癥；兔大腸桿菌的發(fā)病率與內(nèi)毒素呈正相關(guān)，隨著腸絨毛形態(tài)結(jié)構(gòu)和黏膜厚度的恢復(fù)，病兔逐漸恢復(fù)正常；慶大霉素和乳酸菌素對(duì)大腸桿菌感染性腹瀉