RNAi技術(shù)抑制蘿卜過氧化物酶rsprx1基因表達(dá)的初步研究.pdf

1、過氧化物酶參與植物生長(zhǎng)的整個(gè)生命過程，包括花青素代謝。在本實(shí)驗(yàn)室已研究過氧化物酶與花青素關(guān)系的基礎(chǔ)上，為了進(jìn)一步探討過氧化物酶對(duì)花青素的作用機(jī)理，本實(shí)驗(yàn)以“心里美”蘿卜過氧化物酶rsprx1基因?yàn)槟康钠?，?gòu)建含有rsprx1基因正反義片段的植物雙元表達(dá)載體pART-rsprxli，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)，用注射的方法在蘿卜播種后的第65天進(jìn)行轉(zhuǎn)染，此后每3天取一次樣觀察生長(zhǎng)期rsprx1基因的抑制情況，并同時(shí)以含有空質(zhì)粒pART27的農(nóng)桿菌及

2、清水做對(duì)照組，檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)，獲得以下主要結(jié)果：
　　1、抗氧化酶類：
　　過氧化物酶：在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期，pART-rsprxli組的POD活性始終低于兩個(gè)對(duì)照組，注射后第21天時(shí)POD活性達(dá)到最低值(9.82×103U/g·FW)，與兩個(gè)對(duì)照組相比有極顯著性差異(p<0.01)，干擾載體對(duì)rsprx1基因的最大抑制效果發(fā)生在實(shí)驗(yàn)后期。
　　過氧化氫酶：從注射后的第12天開始，pART-rsprxli組的CAT活性開始明顯高

3、于兩個(gè)對(duì)照組，并具有極顯著性差異(p<0.01)。由此證明在過氧化物酶活性較低的情況下，植物體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生更多的過氧化氫酶來消除過剩的自由基。
　　H2O2：pART-rsprxli組H2O2含量始終高于清水組，并從第6天開始有極顯著性差異(p<0.01)；pART-rsprxli組H2O2含量略高于pART-27組，在第18和21天時(shí)有一般顯著性差異(p<0.05)。
　　可溶性蛋白：可溶性蛋白在注射后的第18天開始下降，pA

4、RT-rsprxli組在第21天達(dá)到最低值，且與對(duì)照組相比有極顯著性差異(p<0.01)，rsprx1基因的抑制對(duì)其的影響主要發(fā)生在實(shí)驗(yàn)后期。
　　2、花青素：pART-rsprxli組花青素含量的積累高于對(duì)照組，在處理后第9天及第12天達(dá)到峰值，且與對(duì)照組相比有極顯著性差異(p<0.01)；高效液相分析結(jié)果表明pART-rsprxli組的花青苷在種類和含量上與對(duì)照組相比均有差異。
　　3、相關(guān)基因的RT-PCR：在pART