用MES稀釋液液態(tài)保存山羊精液果糖代謝的研究.pdf

1、精液的冷凍保存是精液長(zhǎng)期保存的有效方法，該技術(shù)在牛的精液保存已得到突破并實(shí)現(xiàn)商業(yè)化，牛冷凍精液的體外受精或人工輸精可以獲得理想受精率。但是山羊的精液冷凍效果卻不理想，盡管解凍后活力可達(dá)30％以上，但受精率和妊娠率較低。因此延長(zhǎng)山羊精液液態(tài)保存時(shí)間和提高山羊精液液態(tài)保存質(zhì)量成為促進(jìn)山羊人工授精技術(shù)推廣應(yīng)用的關(guān)鍵技術(shù)。我們?cè)趧㈤L(zhǎng)河MES卵黃包被液態(tài)保存山羊精液16天活力維持在30％以上的基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)母羊同期發(fā)情處理，分別用保存12、13、

2、14、15、16天的精液人工輸精，并對(duì)返情和妊娠情況進(jìn)行記錄。
　　 保存過(guò)程中精子存活時(shí)間和受精能力會(huì)受到許多因素的影響，例如離子成分、氧化應(yīng)激、代謝性酸中毒、DNA斷裂、精子質(zhì)膜脂類和蛋白組分發(fā)生變化、頂體反應(yīng)以及自發(fā)獲能等，發(fā)現(xiàn)并消除這些不利因素，減少精液保存過(guò)程中精子受到的損傷，構(gòu)建成分簡(jiǎn)單明確而又適宜精子體外存活的保存系統(tǒng)，將為精子代謝機(jī)理研究提供廣闊空間。我們以山羊?yàn)樵囼?yàn)動(dòng)物，以MES、Nacl等構(gòu)建了成分簡(jiǎn)單的pH

3、6.25的MES稀釋液，并在此基礎(chǔ)上對(duì)液態(tài)保存過(guò)程中精子果糖代謝機(jī)理進(jìn)行了研究，以豐富“精子代謝機(jī)理”基礎(chǔ)理論，為動(dòng)物生產(chǎn)和醫(yī)學(xué)臨床提供理論依據(jù)。實(shí)驗(yàn)表明：
　　 (1)保存15、16天的精液用于輸精不能達(dá)到預(yù)期效果，基本都返情；
　　 (2)保存12、13、14天的精液進(jìn)行輸精，這時(shí)的活力能在50％，這部分結(jié)果還沒(méi)拿到。
　　 (3)在15℃條件下，精子既能維持4天的活力，又能保持一定強(qiáng)度的代謝活動(dòng)，適宜我們研

4、究代謝。
　　 (4)15℃保存時(shí)，稀釋液中添加10mM果糖效果最好，精子活力保持30％以上的保存時(shí)間能達(dá)到6d。而葡萄糖濃度超過(guò)10mM/L時(shí)，保存效果反而下降，精子活力保持30％以上的保存時(shí)間又逐漸縮短。
　　 (5)15℃保存時(shí)，在含有果糖的稀釋液中添加碘醋酸酯(Iodoacetate)阻斷精子糖酵解途徑，能顯著降低精子活力，縮短精液保存時(shí)間
　　 (6)15℃保存時(shí)，在含有果糖的稀釋液中添加脫氫表雄酮(d

5、ehydroepiandrosterone)阻斷精子磷酸戊糖途徑，對(duì)精液保存時(shí)間和山羊精子活力有一定的影響。這還有待我們進(jìn)一步進(jìn)行研究確認(rèn)。
　　 總之，通過(guò)本研究我們主要獲得以下結(jié)論：1)保存15、16天的精液用于輸精不能達(dá)到預(yù)期效果，基本都返情；2)15℃保存時(shí)添加果糖有利于山羊精子活力維持；3)15℃保存時(shí)，成分簡(jiǎn)單的MES中添加10mM/L的果糖保存效果最好，最有利于山羊精子存活，超過(guò)10mM/L開始對(duì)精子產(chǎn)生不利影響；