番茄抗病基因Ty-2的分子標(biāo)記及其在輔助選擇中的應(yīng)用.pdf

1、番茄黃化卷葉病毒病是近年來(lái)番茄生產(chǎn)上發(fā)生的一種毀滅性病害,Ty-2基因是發(fā)現(xiàn)較早的主要抗病基因之一。本研究以番茄黃化卷葉病毒病的抗病雜合基因型(Ty-2/ty-2)、抗病純合基因型(Ty-2/Ty-2)和感病基因型(ty-2/ty-2)為實(shí)驗(yàn)材料,根據(jù)已發(fā)表的與Ty-2緊密連鎖的RFLP標(biāo)記設(shè)計(jì)特異引物,利用SCAR標(biāo)記技術(shù)和CAPS標(biāo)記技術(shù),篩選獲得了兩個(gè)與抗病基因Ty-2緊密連鎖的SCAR標(biāo)記,命名為T0302-1和T0302-2,

2、這兩個(gè)標(biāo)記均可以區(qū)別抗病雜合和抗病純合基因型材料,是共顯性SCAR標(biāo)記。
　　 (1)SCAR標(biāo)記T0302-1:利用分子標(biāo)記T0302-1的引物對(duì)實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行PCR擴(kuò)增,感病基因型材料擴(kuò)增出800bp的片段;抗病純合基因型材料擴(kuò)增出900bp的片段;而抗病雜合基因型材料同時(shí)擴(kuò)增出800bp和900bp兩條特異片段。標(biāo)記引物序列為T0302F:5'-TGGCTCATCCTGAAGCTGATAGCGC-3';T0302R:5'-A

3、GTGTACATCCTTGCCATTGACT-3'。
　　 (2)SCAR標(biāo)記T0302-2:利用引物T0302-2的引物對(duì)實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng),感病基因型材料得到450bp的特異片段;抗病純合基因型材料得到600bp的特異片段;而抗病雜合基因型材料同時(shí)得到450bp和600bp兩個(gè)特異片段。其引物序列為T0302F:5'-TGGCTCATCCTG.AAGCTGATAGCGC-3':TY2R1:5'-TGAT(T/G)TG

4、ATGTTCTC(T/A)TCTCT(C/A)GCCTG-3'。
　　 利用11種已知基因型的、不同來(lái)源和不同遺傳背景的番茄材料,對(duì)上述兩個(gè)共顯性SCAR標(biāo)記進(jìn)行了有效性驗(yàn)證。結(jié)果表明這兩個(gè)SCAR標(biāo)記穩(wěn)定、可靠,有效性高,可以應(yīng)用于分子標(biāo)記輔助選擇中。同時(shí)綜合比較發(fā)現(xiàn),T0302-2標(biāo)記在鑒別雜合基因型材料時(shí)更加清晰和容易辨認(rèn),是一個(gè)比較理想的共顯性標(biāo)記。
　　 利用共顯性SCAR標(biāo)記T0302-2在苗期對(duì)番茄F2代群