雞新城疫卵黃抗體的提取工藝及應(yīng)用研究.pdf

1、本試驗(yàn)?zāi)康氖茄芯亢?jiǎn)便快速提取純化卵黃抗體的生產(chǎn)工藝,適用于大規(guī)模生產(chǎn)。卵黃抗體的提取主要就不同濃度泊洛沙姆法、不同濃度PEG6000法、水稀釋法和凍融法相結(jié)合進(jìn)行比較,檢測(cè)提取上清液抗體效價(jià)、去脂率等指標(biāo)。應(yīng)用冷凍干燥方法濃縮卵黃抗體,比較冷凍干燥前后和不同倍數(shù)濃縮后產(chǎn)品抗體效價(jià)的變化。
　　 通過飽和硫酸銨純化卵黃抗體,主要就50％、33%、33%路線純化卵黃抗體,HI測(cè)定純化前后抗體效價(jià)的變化,紫外分光光度計(jì)測(cè)定蛋白含量的變

2、化;SDS-PAGE分析各組提取的卵黃抗體純化后有無差異。
　　 選取母源抗體接近消失的60日齡公雞隨機(jī)分成試驗(yàn)組和對(duì)照組,試驗(yàn)組肌肉注射卵黃抗體,劑量為2ml,試驗(yàn)用卵黃抗體包含新城疫抗體、禽流感H5亞型、禽流感H9亞型抗體,研究機(jī)體肌肉注射卵黃抗體對(duì)血清抗體效價(jià)的影響。
　　 選取新城疫抗體水平為陰性的公雞隨機(jī)分為6組:預(yù)防組、自愈組、低劑量治療組、中劑量治療組、高劑量治療組、對(duì)照組,通過新城疫病模型試驗(yàn)研究肌肉注射

3、卵黃抗體的治療效果。預(yù)防組在接毒前后2天肌肉注射2ml抗ND卵黃抗體;自愈組不做任何治療;治療組接毒72h后開始連續(xù)治療3天;低劑量組每天肌肉注射1ml;中劑量組2ml:高劑量組4ml;對(duì)照組注射生理鹽水。
　　 試驗(yàn)結(jié)果如下
　　 1、1.0%泊洛沙姆法上清液微黃,沉淀結(jié)實(shí)易分離;3.5%PEG6000和1:10水稀釋法上清液清澈,但沉淀不結(jié)實(shí),不易分離。以氯仿提取法得到的卵黃抗體為標(biāo)準(zhǔn),1.O%泊洛沙姆法上清液效價(jià)比

4、氯仿提取法得到的卵黃抗體低1-2個(gè)HI效價(jià)滴度,3.5%PEG6000法上清液效價(jià)比氯仿提取法抗體效價(jià)降低3個(gè)HI抗體滴度。1:10水稀釋法上清液效價(jià)比氯仿提取法抗體效價(jià)低了4-5個(gè)HI抗體滴度;因此1.0%泊洛沙姆法提取抗體效價(jià)較高,結(jié)合凍融法可以進(jìn)一步去脂,減少了后期濃縮的工作量,符合大規(guī)模提取要求。
　　 2、卵黃抗體純化結(jié)果
　　 飽和硫酸銨可以有效的純化卵黃抗體,各組純度差異不大,電泳分析主要以66KD條帶為主

5、,抗體效價(jià)上升2-3個(gè)滴度,蛋白含量明顯上升,表明卵黃抗體可以用此方法純化。
　　 3、卵黃抗體濃縮結(jié)果
　　 冷凍干燥可以有效濃縮卵黃抗體產(chǎn)品,冷凍干燥前后原倍稀釋抗體活性滴度一致,5倍濃縮產(chǎn)物上升2個(gè)HI抗體滴度,10倍濃縮產(chǎn)物上升5個(gè)HI抗體滴度,說明冷凍干燥可以明顯提高卵黃抗體產(chǎn)品效價(jià)。
　　 4、肌肉注射卵黃抗體對(duì)雞血清抗體效價(jià)的影響
　　 檢測(cè)到注射后1-8天,試驗(yàn)組血清各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的新城疫抗體

6、水平均極顯著高于與對(duì)照組(P＜0.01);注射后1-11天,試驗(yàn)組血清禽流感H5亞型抗體水平均極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01);注射后1-14天,試驗(yàn)組血清禽流感H9亞型抗體水平均極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01),高滴度抗體水平維持5-6天后開始逐步衰減。
　　 5、卵黃抗體抗新城疫治療結(jié)果
　　 預(yù)防組死亡率為5%,自愈組死亡率為70%、低劑量死亡率40%、中劑量死亡率為30%、高劑量治療組死亡率15%,對(duì)照組無死亡,

7、預(yù)防組保護(hù)率為95%,治療組保護(hù)率比自愈組提高了30%-55%;并且在恢復(fù)過程中預(yù)防組和治療組恢復(fù)正常采食要早,雞冠恢復(fù)正常顏色要快,表明肌肉注射卵黃抗體應(yīng)用于新城疫治療明顯有效。
　　 結(jié)論:
　　 1、1.0%泊洛沙姆結(jié)合凍融法適合于大量提取卵黃抗體
　　 1.0%泊洛沙姆可以減少卵黃稀釋倍數(shù),減少后續(xù)工作,且在試驗(yàn)組中上清液效價(jià)最高;凍融法可以進(jìn)一步去除卵黃抗體產(chǎn)品的含脂量,簡(jiǎn)單易行,兩種方法聯(lián)合應(yīng)用適合大

8、規(guī)模生產(chǎn)。
　　 2、重復(fù)飽和硫酸銨法能有效純化卵黃抗體
　　 飽和硫酸銨法可以有效去除卵黃抗體中的雜蛋白,抗體滴度和蛋白含量得到了明顯升高,在4種方法得到的卵黃抗體純化后純度無太大差異。
　　 3、冷凍干燥法適用于濃縮卵黃抗體
　　 冷凍干燥對(duì)卵黃抗體效價(jià)活性沒有影響,濃縮產(chǎn)物抗體效價(jià)上升,效果明顯。
　　 4、抗NDV卵黃抗體對(duì)雞新城疫病具有顯著的防治作用
　　 試驗(yàn)動(dòng)物新城疫抗體為陰