小麥組織再生體系的優(yōu)化及高光效基因SRX的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、相比與其他禾本科植物，小麥組織培養(yǎng)技術(shù)和再生體系的研究開始較晚，遺傳轉(zhuǎn)化效率也相對較低，研究小麥組織培養(yǎng)條件和植株再生頻率的影響因素，優(yōu)化小麥遺傳轉(zhuǎn)化體系對于有效開展小麥轉(zhuǎn)基因育種有重要意義。光合作用是植物生長必不可少的因素，然而過量的光照，卻能夠抑制光合作用，降低光合作用的效率和（或者）最大光合速率，稱為光抑制，嚴重時還會造成光合機構(gòu)的光氧化破壞，因此利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)降低小麥光抑制是增加小麥產(chǎn)量的有效途徑。
　　 本試驗以隴春2

2、3、華2533、Bobwhite等8個小麥品種為材料，研究了不同基因型、分化培養(yǎng)基中添加不同金屬元素對小麥幼胚離體培養(yǎng)的影響。結(jié)果如下:8種不同小麥品種幼胚出愈率均達到94％以上，說明品種的基因型對小麥幼胚的出愈率影響不大，但是不同小麥基因型間幼胚的胚性愈傷組織誘導(dǎo)率存在很大差異，胚性愈傷組織發(fā)生頻率高的品種和基因型，繼代培養(yǎng)后再生率也相對較高。在分化培養(yǎng)基上添加2.5mg/L Ag+、0.25 mg/L Cu2+或者1.5mg/L Z

3、n2+有助于提高小麥幼胚愈傷組織再生率。
　　 在此基礎(chǔ)上，進行硫過氧化物還原因子（SRX基因）轉(zhuǎn)化小麥的研究，希望得到高光效的小麥種質(zhì)。用pUBI∷Bar和pAct∷SRX表達載體對小麥材料隴春23、華2152和Bobwhite幼胚進行了的基因槍法共轉(zhuǎn)化。提取基因組DNA進行Bar基因和SR基因的PCR檢測，轉(zhuǎn)化隴春23幼胚共得到T0代陽性植株有Bar+32株，SRX+11株，轉(zhuǎn)化率分別為19.3％和6.6％;得到Bobwhi

4、te的T0代抗性植株Bar+13株，SRX+9株，轉(zhuǎn)化率分別為13.3％和9.2％;轉(zhuǎn)化華2152幼胚得到T0代陽性植株0株，轉(zhuǎn)化率0％;PCR檢測T1代轉(zhuǎn)基因植株，分別得到隴春23Bar+11株，SRX+4株，T1代分離比為21∶11和7∶4;Bobwhite得到Bar+9株，SRX+3株，T1代分離比為4∶9和2∶1。由此可知，T0代和T1代植株屬于嵌合體，非純合轉(zhuǎn)基因植株。設(shè)置對照，測定T1代轉(zhuǎn)基因植株的光合作用效率，其光抑制與野