四個月季品種體細胞胚誘導(dǎo)及遺傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、月季(Rosa hybrida)是薔薇科薔薇屬的半常綠木本植物，是世界上栽培歷史最久、最受人們鐘愛的觀賞花卉之一，因其花色艷麗、香味濃郁，被譽為中國傳統(tǒng)十大名花之一，切花月季同時又是世界重要切花之一，具有很高的觀賞價值和商業(yè)價值。本試驗對四個現(xiàn)代月季切花品種的快速繁殖體系進行了建立，并以未展開復(fù)葉片為外植體，建立了體細胞胚發(fā)生途徑及再生體系。同時利用體細胞胚再生體系進行了遺傳轉(zhuǎn)化的初步研究。其主要研究結(jié)果如下：
　　 1.月季快

2、速繁殖體系的建立
　　 以現(xiàn)代月季品種‘卡羅拉’為試材，對其組培過程中消毒、初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和煉苗移栽等各個環(huán)節(jié)進行了研究。研究結(jié)果表明：消毒時去掉葉柄降低了污染率，且腋芽萌發(fā)良好；增殖培養(yǎng)基以MS+1.0mg/L6-BA+0.05mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.5g/L卡拉膠的效果最好，長勢健壯，不定芽增殖系數(shù)達到3.41；最適宜的生根培養(yǎng)基是1/2MS+0.05mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.5g/L

3、卡拉膠，平均根長在2.52cm，根系發(fā)達，根的生長狀態(tài)最佳。在移栽試驗中，經(jīng)過6天煉苗處理，成活率達到94.44％。
　　 2.月季體細胞胚發(fā)生途徑及再生體系的建立
　　 以四個現(xiàn)代月季切花品種‘卡羅拉’、‘黑魔術(shù)’、‘假日公主’、‘莫尼卡’的未展開復(fù)葉片為外植體，通過直接途徑和間接途徑對體細胞胚誘導(dǎo)及再生等條件進行了研究。結(jié)果表明：基因型、外植體類型、不同激素種類及濃度組合、培養(yǎng)條件對體細胞胚誘導(dǎo)和植株再生都產(chǎn)生著重要

4、影響。四個月季品種的組培苗未展開復(fù)葉片和露地中的未展開復(fù)葉片都沒有通過直接發(fā)生途徑得到體細胞胚。以組培苗的未展開復(fù)葉片為外植體通過間接發(fā)生途徑，只有‘卡羅拉’有體細胞胚發(fā)生，其他三個月季品種均沒有得到體細胞胚。‘卡羅拉’體細胞胚的誘導(dǎo)率在不同的培養(yǎng)基上存在顯著差異，在MS+2.0mg/L ZT+0.1mg/L NAA+30g/L葡萄糖+2.5g/L植物凝膠的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)率最高，達到13.33％?！_拉’體細胞胚在MS+1.5mg/L

5、ZT+0.2mg/LNAA+0.1mg/L GA3+60g/L葡萄糖+2.5g/L植物凝膠的培養(yǎng)基上生長旺盛，光澤度好，增殖系數(shù)為4.02，體細胞胚組織比例達到90％以上，有次生胚長出，增殖效果最好。‘卡羅拉’體細胞胚在MS+1.0mg/L6-BA+0.01mg/L IBA+30g/L葡萄糖+2.5g/L植物凝膠的培養(yǎng)基上體細胞胚萌發(fā)率最高，達到43.33％，單位體細胞胚成苗數(shù)是1.31。
　　 此外，‘卡羅拉’組培苗在生根試驗

6、中，光照條件培養(yǎng)于1/2MS+1.0mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.5g/L卡拉膠的培養(yǎng)基上，8周之后發(fā)現(xiàn)在根軸部位通過直接發(fā)生途徑長出子葉狀體細胞胚。然后置于體細胞胚增殖培養(yǎng)基：MS+1.5mg/L ZT+0.2mg/LNAA+0.1mg/L GA3+60g/L葡萄糖+2.5g/L植物凝膠培養(yǎng)，增殖效果顯著。
　　 3.以體細胞胚為轉(zhuǎn)化受體的月季遺傳轉(zhuǎn)化的研究
　　 以‘卡羅拉’體細胞胚作為農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)