CmbZIP-like和CmAPP基因在盾殼霉發(fā)育和產(chǎn)孢過程中的功能分析.pdf

1、盾殼霉(Coniothyrium minitans)是核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)的重寄生真菌，對作物菌核病有顯著控制作用。分生孢子是盾殼霉存活、寄生和傳播的主要形式，同時也是盾殼霉生防制劑的主要成分，在盾殼霉生長發(fā)育的重要環(huán)節(jié)起重要作用。研究和理解盾殼霉分生孢子形成的調(diào)控信號具有重要的理論意義和實踐價值。本文以盾殼霉ZS-1菌株T-DNA插入標(biāo)記的產(chǎn)孢缺陷型突變體ZS-1T11329和ZS-1T21656

2、為材料，對它們的生物學(xué)性狀和分子生物學(xué)性狀進行了系統(tǒng)的研究，結(jié)果如下：
　　 突變體ZS-1T11329在PDA上不能產(chǎn)生分生孢子器，生長速度明顯快于ZS-1，菌絲分支增多，寄生致腐核盤菌菌絲、菌核能力有所下降，核盤菌菌絲、菌核不能恢復(fù)其產(chǎn)孢性狀，但是部分突變體如ZS-1T21656可以恢復(fù)其產(chǎn)孢，產(chǎn)生的分生孢子與ZS-1孢子的形態(tài)一致，能夠正常萌發(fā)生長，證明ZS-1T11329的產(chǎn)孢可以恢復(fù)。
　　 突變體ZS-1T2

3、1656不能產(chǎn)生分生孢子器；菌絲尖端彎曲，分支短而多；生長速度、寄生致腐菌核能力與ZS-1無明顯差異；寄生核盤菌菌絲能力下降，產(chǎn)抗真菌物質(zhì)能力增強。
　　 Southern雜交證實T-DNA標(biāo)記在突變體ZS-1T11329和ZS-1T21656中均為單拷貝插入。突變體ZS-1T11329中T-DNA插入在一編碼區(qū)為793 bp的基因的啟動子區(qū)域，該基因的推定蛋白與堿性亮氨酸拉鏈(bZIP)轉(zhuǎn)錄因子蛋白具有同源性，故將其基因命名為

4、CmbZIP-like；突變體ZS-1T21656中T-DNA插入在一編碼區(qū)1993 bp的基因的啟動子區(qū)域，該基因的推定蛋白與氨酰基脯氨肽酶具有高度同源性，并含有其保守結(jié)構(gòu)域APP，故命名基因為CmAPP。CmbZIP-like和CmAPP基因在ZS-1基因組內(nèi)均為單拷貝。
　　 利用敲除、互補的方法，農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化(ATMT)技術(shù)對以上基因的功能進行了研究。構(gòu)建了CmbZIP-Iike基因和CmAPP基因的敲除載體，分別利用