基于ISSRs的安徽省杜仲資源的遺傳多樣性研究.pdf

1、杜仲(EucommiaulmoidesOliv.)為我國(guó)特有的第三紀(jì)孑遺植物和名貴的藥用木本植物,本論文包含兩部分內(nèi)容:(1)杜仲SSR-PCR反應(yīng)體系建立及引物篩選;(2)基于ISSRs的安徽省杜仲資源的遺傳多樣性研究。
　　采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)和單因素分析,建立并優(yōu)化了杜仲的SSR-PCR反應(yīng)體系。結(jié)果表明,杜仲SSR-PCR最適反應(yīng)體系為正反向引物(10μmol·L-1)各0.2μL,TaqDNA聚合酶(5U·μL-1)0.1μ

2、L,dNTP(10mmol·L-1)0.2μL,模板DNA(5~10ng·μL-1)1.0μL,Mg2+(25mmol·L-1)0.6μL,10×PCR緩沖液1.0μL,HPLC超純水6.7μL,總體積10.0μL。同時(shí)篩選出了3對(duì)多態(tài)性有效引物,研究結(jié)果證明了微衛(wèi)星引物在不同物種間的通用性受物種間親緣關(guān)系遠(yuǎn)近的影響,并初步揭示了杜仲的遺傳多樣性,表明了微衛(wèi)星標(biāo)記在遺傳多樣性研究上的優(yōu)越性。
　　利用ISSR分子標(biāo)記技術(shù),對(duì)安徽省

3、4個(gè)杜仲居群共107個(gè)樣本樹(shù)木進(jìn)行了遺傳多樣性分析,共檢測(cè)到200個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)。結(jié)果表明,居群水平上,各居群平均多態(tài)性位點(diǎn)百分率PPLp=45.25％,有效等位基因數(shù)nep=1.199,Nei’s基因多樣性指數(shù)Hep=0.126,Shannon’s多態(tài)性信息指數(shù)Ip=0.198;物種水平上,多態(tài)性位點(diǎn)百分率PPLs=100.00%,有效等位基因數(shù)nes=1.215,Nei’s基因多樣性指數(shù)Hes=0.164,Shannon’s多態(tài)性信息

4、指數(shù)Is=0.292,遺傳分化系數(shù)Gst=0.2319;AMOVA分子方差分析顯示,居群間與居群內(nèi)遺傳變異分別占總遺傳變異的40.40%和59.60%,表明居群內(nèi)的遺傳變異占大部分,但居群間也呈現(xiàn)了高度的遺傳分化;UPGMA聚類(lèi)分析將4個(gè)杜仲居群明顯區(qū)分開(kāi)來(lái),且表明分組情況與居群的地理分布沒(méi)有關(guān)聯(lián)。研究結(jié)果將為建立安徽省杜仲的遺傳資源檔案,現(xiàn)有種質(zhì)資源的科學(xué)保護(hù)、交流和永續(xù)利用,以及為今后的雜交育種工作中親本的選配提供可靠的理論依據(jù)和實(shí)