安徽三省地區(qū)柔嫩艾美爾球蟲耐藥性分析.pdf

1、采集安徽省巢湖市、霍邱縣及定遠縣三個地區(qū)患球蟲病雞的盲腸,實驗室分離培養(yǎng),并進行單卵囊分離擴增,運用生物學(xué)特性的觀察與測定及聚合酶鏈式反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)對單卵囊分離物進行鑒定,為純種柔嫩艾美爾球蟲(E.tenella)的分子生物學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。
　　試驗選擇馬杜拉霉素(Maduramicin,MAD)、莫能霉素(Monensin,MON)、妥曲珠利(Toltrazuril,TOL)、

2、磺胺氯吡嗪鈉(Sulfachloropyrazine sodium,SUS)及氯羥吡啶(Clopidol,CLP)5種藥物,雞體試驗法檢測三地球蟲的耐藥性,用最適抗球蟲活性百分率(Percent of optionanti-coccidial activity,POAA)、病變記分減少率(Reduction of lesion scores,RLS)、相對盲腸卵囊產(chǎn)量(Relative oocyst production,ROP)及抗球

3、蟲指數(shù)(Anti-coccidial index,ACI)四項指標(biāo)對三地球蟲進行耐藥性評價,并根據(jù)四項指標(biāo)中陽性指標(biāo)數(shù)量判定耐藥程度。同時,通過功能亞基、DNA隨機多態(tài)性擴增(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)及同工酶電泳分析等分子生物學(xué)方法比較耐藥株與敏感株間的差異,觀察耐藥蟲株的遺傳變異情況。
　　依據(jù)三個不同地區(qū)蟲株的耐藥情況,試驗選用新藥阿德呋啉粉劑和水溶劑進行療效觀察,以ACI和

4、綜合耐藥性指數(shù)(Gain Index,GI)綜合評價阿德呋啉對耐藥蟲株的治療效果。
　　試驗結(jié)果表明:1)單卵囊分離:1.0％瓊脂單卵囊分離法簡便易行,成功率高。三個地區(qū)的單卵囊感染成功率分別為50%、57%和29%,經(jīng)鑒定均為純種E.tenella。2)雞球蟲體內(nèi)檢測:分離的蟲株對試驗所選5種抗球蟲藥均有不同程度的耐藥性。巢湖株(CH株)氯羥吡啶組(CLP組)ACI值為183.26,敏感,而該株對MON已呈完全耐藥,對MAD、T

5、OL及SUS已呈中度耐藥?；羟裰?HQ株)妥曲珠利組(TOL組)ACI值為180.48,敏感,而對SUS和CLP已呈高度耐藥,對MAD和MON已呈中度耐藥。定遠株(DY株)對5種抗球蟲藥均不敏感,其中對MAD、TOL及SUS已呈高度耐藥,而對MON和CLP呈輕度耐藥。3)球蟲體外分析:與敏感株相比,安徽地區(qū)3株E.tenellacox1和cox3基因序列均無明顯差異,同種不同地理株間的相似值均較高,說明E.tenellacox1和cox

6、3基因序列相對保守,但有關(guān)遺傳變異的情況有待進一步研究;RAPD擴增圖譜都有不同的帶,且不同蟲株間亦有相似或位置相同的條帶,它們之間的相似值位于50.00%—69.39%之間,SH敏感株與DY株間的SI值最小為50.00%,CH株與HQ株間的SI值最大為69.39%;耐藥株間的平均SI值為58.05%,敏感株間的SI值為52.94%,與不同敏感株相比,各蟲株SI值均較低,變異程度大;敏感株LDH僅有一深色的條帶,HQ株也僅有一條與敏感株

7、相同的條帶,且地方耐藥株間存在交叉條帶,如CH株與DY株間存在交叉條帶,只是條帶顏色深淺不一;敏感株的GPI有兩條帶,而安徽地區(qū)耐藥株均有不同的差異,耐藥株與敏感株間、耐藥株間均存在交叉條帶,如CH株、HQ株間重復(fù)了GPI-2和GPI-5兩條帶,但帶的深淺不一,敏感株與DY株間重復(fù)了GPI-3條帶;敏感株G6PD僅有一條帶,CH株和HQ株有相同的G6PD-2帶,但HQ株多出一條G6PD-3深帶,DY株與敏感株有相同的G6PD-1,但多出

8、一條G6PD-4淺帶。4)阿德呋啉療效觀察:與陽性對照組相比,除HQ株拌料給藥組外,其余阿德呋啉給藥組ACI值均高于180,對三地雞球蟲病均有良好的療效。阿德呋啉拌料給藥與飲水給藥相比,CH株中,拌料給藥組ACI值和GI值分別為185.70和87.05,高于飲水給藥;HQ株中,飲水給藥組ACI值和GI值分別為183.57和81,59,高于拌料給藥組;DY株中,拌料給藥組ACI值和GI值分別為198.27和99.58,高于飲水給藥,說明不