轉(zhuǎn)Bt多年生海島棉種質(zhì)創(chuàng)新及抗蟲蛋白的嫁接傳導(dǎo)研究.pdf

1、自Bt基因?qū)朊藁ㄆ贩N以來，我國轉(zhuǎn)Bt抗蟲棉的推廣極大地減輕了農(nóng)民植棉的勞動(dòng)強(qiáng)度，受到農(nóng)民的廣泛歡迎。
　　 Bt（蘇云金芽孢桿菌）基因是近些年來研究比較多的在植物的抗蟲方面（尤其是鱗翅目昆蟲）發(fā)揮重要作用的植物特異性基因。當(dāng)有害蟲侵襲時(shí)，便會(huì)激活抗蟲基因的表達(dá)，通過基因的轉(zhuǎn)錄、翻譯，形成抗蟲蛋白，此類蛋白對(duì)鱗翅目昆蟲具有高毒性，從而提高植物對(duì)鱗翅目昆蟲的抵抗力，使植物的抗蟲性得到綜合性改良，是迄今為止最理想的植物抗蟲工程基因。

2、
　　 本研究從中棉41中克隆了一個(gè)Bt基因，然后通過花粉管通道注射法將其轉(zhuǎn)入海島棉中，并通過中棉41與海島棉的雜交、中棉41與海島棉的互相嫁接，以轉(zhuǎn)基因、基因漸滲、蛋白轉(zhuǎn)移多種方式提高海島棉的抗蟲性。主要研究結(jié)果分為種質(zhì)創(chuàng)新和抗蟲蛋白嫁接傳導(dǎo)兩個(gè)部分。
　　 種質(zhì)創(chuàng)新部分:
　　 1.根據(jù)中棉41的Bt基因序列設(shè)計(jì)特異性引物p1和p2，進(jìn)行pcr擴(kuò)增，得到一個(gè)長1824bp的基因。
　　 2.將PCR擴(kuò)

3、增得到的基因片段連接在克隆載體T載體上。
　　 3.設(shè)計(jì)的特異性引物p1和p2分別含有sac1和Bamh1的酶切位點(diǎn)，用sac1和Bamh1分別對(duì)連在T載體上的Bt基因和pni121質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切，用T4 DNA ligase連接，構(gòu)建植物表達(dá)載體。
　　 4.利用花粉管通道注射法將構(gòu)建好的載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)入海島棉，通過kan抗性、pcr篩選鑒定陽性植株。
　　 5.通過中棉41與海島棉的雜交，雜交F1代的回交與測(cè)交等